Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

5 Anwendung der Methode
Konzentrationen als mobile Phase verwendet, wodurch relativ große Mengen an
Substanz benötigt werden. Im Vergleich dazu wird für die Immobilisierung des
Liganden nur sehr wenig Substanz benötigt. Aus Kostengründen ist es somit oftmals
besser, das teuere Protein zu immobilisieren und das Peptid als Analyt zu
verwenden. Zudem hat das Immobilisieren des Proteins den Vorteil, dass mit einem
Chip mehrere Peptide auf ihre Interaktion hin getestet werden können. Wie bei allen
Immobilisierungen ist auch bei der Beladung der Sensorchipoberfläche mit dem
Liganden darauf zu achten, dass der Ligand durch die Immobilisierung nicht an
Aktivität verliert. Ein solcher Verlust könnte beispielsweise erfolgen, wenn eine für die
Interaktion wichtige Stelle des Moleküls (Bindungsdomäne) zur Immobilisierung
verwendet würde oder die dreidimensionale Struktur des Liganden beeinträchtigt
würde. Ich habe mich für die Immobilisierung des Proteins (Streptavidin) auf einem
CM5-Sensorchip entschieden. Der Aufbau eines solchen CM5-Sensorchips ist in
Abb. 5.12 a) dargestellt. Bei allen Sensorchips der CM-Serie ist eine Carboxylmethyl-
dextranmatrix kovalent an die Goldoberfläche gebunden. Die Dextranmatrix ist
flexibel und erlaubt dem daran fixierten Liganden relativ freie Bewegungen. Der
CM5-Sensorchip ist der am häufigsten eingesetzte Chip der CM-Serie. Er zeichnet
sich dadurch aus, dass sowohl kleine als auch sehr große Moleküle daran
immobilisiert werden können. Anstelle von CM5-Sensorchips wäre auch die
Verwendung von Streptavidin- Sensorchips denkbar. Zwei Gründe sprechen jedoch
gegen deren Einsatz: Zum Ersten sind diese erheblich teurer als CM5-Sensorchips,
und zum Zweiten hat man keinen Einfluß auf deren Beladung. Belädt man die CM5-
Sensorchipoberfläche jedoch selbst mit Streptavidin, kann die Beladung gesteuert
werden.
N
HN N
O N O Ligand
HO O EDC O O NHS O O
O
90
Abb. 5.13 Immobilisierungsstrategie auf CM 5 Sensor-Chip.
H
NH 2
Ligand
NH