Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
und lässt über Nacht einwirken. Nach Trocknen am Vakuum wird das vom Harz
abgespaltene Peptid in 5 µl Solvent A (0.1% TFA in Wasser/Acetonitril (1:2))
aufgenommen. 0,5 µl der Peptidlösung und 0,5 µl Matrixlösung (gesättigte α-Cyano-
4-hydroxyzimtsäure in Solvent A/MeOH (5:2)) werden auf dem MALDI-Target
gemischt und können nach Kristallisation analysiert werden.
Abspaltung von mehreren Harzkugeln
In einer Einwegspritze mit eingesetzter PE-Fritte wird die gewünschte Menge Harz
eingewogen, die wie oben beschrieben hergestellte Bromcyan-Lösung wird
aufgezogen und wirkt über Nacht ein. Das in der Lösung enthaltene abgespaltene
Peptid wird aus der Spritze gedrückt. Das Harz wird noch zweimal mit 70% TFA in
Wasser nachgespült. Im Stickstoff-Gegenstrom wird die TFA abgedampft. Der
Rückstand wird in Wasser aufgenommen und lyophilisiert. Das so erhaltene Peptid
kann anschließend mittels RP-HPLC aufgereinigt und charakterisiert werden.
AAV 15 BNPS-Skatol / Trp–Xaa Spaltung
Unmittelbar vor Gebrauch werden 1,3 mg BNPS in 1 ml Essigsäure (88% aq.) gelöst.
Trp-Xaa Spaltung: Sollbruchstelle im cyclischen Peptid
Zur selektiven Spaltung der Trp-Xaa Bindung (also C-terminal von Trp) wird das
Peptidylharz (ohne Seitenkettenschutzgruppen) mit zuvor frisch zubereiteter BNPS-
Lösung (2,8 eq. in Bezug auf die zu spaltende Trp-Xaa Bindung) behandelt. Danach
wird das Harz dreimal mit 88% Essigsäure, einmal mit Methanol und zehnmal mit
DCM gewaschen. Anschließend wird das Harz am Vakuum getrocknet.
Trp-TG Spaltung: Linker
Das Vorgehen der Reaktion erfolgt analog zur Trp-Xaa Spaltung. Nur wird hier die
BNPS-Lösung, die das abgespaltene Peptid enthält, aufbewahrt. Das Harz wird
viermal mit 88% Essigsäure und zweimal mit Methanol gewaschen. Die
Waschlösung wird mit der BNPS-Peptidlösung vereint. Anschließend wird das
Volumen durch Zugabe von Wasser verdoppelt und lyophilisiert. Das so erhaltene
Lyophilisat wird erneut in Wasser aufgenommen und nochmals lyophilisiert. Das
Peptid kann nun mittels RP-HPLC und Massenspektrometrie charakterisiert werden.
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