Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

2 Aufgabenstellung
2.1 Analytik von Cyclopeptiden
2 Aufgabenstellung
In der Natur sind cyclische Peptide weit verbreitet. In vielen Fällen weisen sie eine
hohe biologische Aktivität auf und stellen somit eine potentielle Substanzklasse für
Wirkstoffe, Leitstrukturen und molekulare Werkzeuge dar. Die Split-Mix-Synthese [10]
ermöglicht eine effiziente und schnelle Darstellung cyclischer OBOC-
Peptidbibliotheken [13] mit einer großen Mitgliederzahl. Nach dem Screening, dem
Test der Mitglieder auf Aktivität, stößt man jedoch bei der Analytik der Hitbeads auf
den Engpass der Methode. Zur Identifikation der aktiven Komponente steht lediglich
eine einzelne Harzkugel zur Verfügung. An diese sind je nach Beladungsdichte
typischerweise zwischen 100 pmol und 5 nmol der aktiven Verbindung gebunden.
Aufgrund ihrer hohen Sensitivität können Massenspektrometrie und auch auf Edman-
Abbau basierte Methoden zur Analytik solch geringer Peptidmengen herangezogen
werden. Neben der geringen Substanzmenge weisen OBOC-Cyclopeptid-
bibliotheken jedoch noch eine weitere analytische Herausforderung auf. Sie besitzen
oft keinen freien N-Terminus und sind somit für die Chemie des Edman-Abbaus nicht
zugänglich. Auch in der Massenspektrometrie liefern sie aufgrund ihrer cyclischen
Verbrückung meist keine eindeutig auswertbaren Spektren. [28] Eine präanalytische,
also unmittelbar vor der Sequenzierung stattfindende, Transformation der cyclischen
Peptide in lineare Peptide würde einen deutlich besseren Zugang sowohl zu massen-
spektrometrischen, als auch zu Edman-basierten Methoden ermöglichen.
Ziel der Arbeit war die Entwicklung einer effizienten Methode zur Sequenzierung
cyclischer Peptide, die als aktive Substanzen aus einer OBOC-Bibliothek her-
vorgingen. Zunächst sollte die Einführung und Spaltung molekularer Sollbruchstellen
zur gezielten Peptidringöffnung untersucht werden. Die daraus resultierenden,
vormals cyclischen, Peptide sollten anschließend zuverlässig mit in unseren
Laboratorien zur Verfügung stehenden Methoden sequenziert werden. Nach der
Entwicklung der Methode sollte ihr Nutzen anhand einer konkreten Anwendung
gezeigt werden. Die durch die Anwendung gefundenen Cyclopeptide sollten
schließlich auf Ihre Bindungsaktivität hin untersucht werden.
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