Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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8 Experimenteller Teil<br />
8.1 Allgemeine Angaben zur Analytik<br />
8.1.1 HPLC<br />
8 Experimenteller Teil<br />
Analytische und präparative RP-HPLC erfolgte an einem modularen HPLC-System<br />
LC-20A prominence ausgestattet mit zwei seriellen Tandemkolbenpumpen LC-20AT,<br />
automatischem Probengeber SIL-20A, Säulenofen CTO-20AC, Photodiodenarray-<br />
detektor SPD-M20A und Datenbus CBM-20A (Shimadzu).<br />
Folgende Säulen kamen zum Einsatz (alle von Knauer):<br />
Nucleosil 100-5 C18, 250x4 mm (analytische Trennung)<br />
Eurosphere 100-5 C18, 250x4 mm (analytische Trennung)<br />
Eurosphere 100-10 C18, 250x16 mm (präparative Trennung)<br />
Die verwendeten Eluenten setzten sich aus den folgenden Lösungen zusammen:<br />
A: 0,1% TFA in Wasser B: 0,1% TFA in Acetonitril<br />
A°:0,1% Ameisensäure in B°: 0,1% Ameisensäure in Acetonitril<br />
Wasser<br />
8.1.2 Massenspektrometrie<br />
Die MALDI-TOF-Massenspektren wurden an einem Bruker Biflex III Spektrometer<br />
mit einem gepulsten Stickstofflaser (337 nm) im positiven reflektron Modus<br />
aufgenommen.<br />
Als Matrix wurde, wenn nicht anders beschrieben, eine gesättigte Lösung aus<br />
α-Cyano-4-hydroxyzimtsäure (CHCA) in Acetonitril / 0,1% TFA (aq.) (2:1) verwendet.<br />
Zur Probenpräparation wurden je 0,8 µl der Matrix- und Probenlösung auf das target<br />
aufgetragen, gemischt und bei Raumtemperatur kristallisiert. Die Kalibrierung mittels<br />
linearer Regression wurde mit einer Mischung aus folgenden Peptiden vorge-<br />
nommen: Neurotensin 1672,92 m/z, Angiotensin I 1296,69 m/z, Angiotensin II<br />
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