Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
AAV 6 Bestimmung der Beladungsdichte
Zur Bestimmung der Beladungsdichte wird eine kleine Menge Harz (3-5 mg) mit 20%
Piperidin in DMF (10 ml) für 15 Minuten behandelt. Von der Lösung werden
verschiedene Verdünnungen hergestellt und die UV-Absorption bei 301 nm in
Küvetten mit einem Durchmesser von 1 cm gemessen. Über die Gleichung der
Eichgeraden
E = 0,0077·c
mit E = Extinktion, c = Konzentration in µmol/l, wird die Konzentration der
Abspaltlösung und darüber die Beladung berechnet.
AAV 7 Festphasen-Peptidsynthese am Peptidsynthesizer ABI 433A
Für den 20 µmol Ansatz werden folgende Lösungen verwendet. Die Zahlen geben
die jeweiligen Flaschennummer am Synthesizer an; nicht erwähnte Flaschen-
nummern bleiben leer:
1) abs. Piperidin
4) Cappinglösung:
115 mg HOBt wird in ca. 40 ml NMP gelöst. 2,4 ml Acetanhydrid und
1,1 ml DIPEA werden zugegeben. Anschließend wird die Lösung
mit NMP auf 50 ml aufgefüllt.
6) MeOH HPLC grade
7) 1,6 M DIPEA in NMP:
13,7 ml DIPEA werden mit 36,6 ml NMP gemischt.
8) 0,38 M HOBt/HBTU in NMP:
In einem Messzylinder werden 7,58 g (20 mmol) HBTU und 3,06 g (20 mmol) HOBt
eingewogen und auf 50 ml mit NMP aufgefüllt. Anschließend wird solange gerührt,
bis sich alles aufgelöst hat (ungefähr 10 Minuten).
9) DCM, peptide grade
10 und 11) NMP, peptide grade
Die gleichen Lösungen werden auch für den 10 µmol Ansatz verwendet, lediglich in
Flasche 7 befindet sich eine 0,8 M Lösung von DIPEA in NMP.
122