Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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8 Experimenteller Teil<br />
8.3.8.3 Synthese der Kontrollpeptide zur Optimierung des on-beadassays<br />
Standard aminofunktionalisiertes TentaGel wurde nach AAV 1 mit Fmoc-Met-OH<br />
beladen. Es ergab sich eine Beladungsdichte von 0,13 mmol/g. Die Festphasen-<br />
synthese des Peptids erfolgte am Peptidsynthesizer nach AAV 7. 20µMspezial.kem<br />
wurde als chemistry file ausgewählt. Für den ersten Zyklus wurde die Modulfolge<br />
eGD (initial Wash) verwendet. Zyklus zwei bis zehn verlief mit der Modulfolge<br />
BbDAFiiihD (Single Couple, Cond Cap/5 eq.) und als abschließender Zyklus folgte<br />
Dc (Final Wash). Folgende Aminosäurebausteine wurden verwendet: Fmoc-Ala-OH,<br />
Fmoc-βAla-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-<br />
His(Trt)-OH und Fmoc-Pro-OH. Nach der automatisierten SPPS erfolgte die<br />
Abspaltung der N-terminalen Fmoc-Schutzgruppe nach AAV 10, sowie die<br />
Entfernung der säurelabilen Schutzgruppen nach AAV 12.<br />
Zur Analytik wurden kleine Mengen des Peptids entnommen und mit BrCN nach AAV<br />
14 gespalten.<br />
Positivkontrolle<br />
H-Gly-His-Pro-Gln-Gly-βAla-Pro-Pro-Arg-Hsl<br />
Analytische RP-HPLC (Eurosphere-Säule): (10-85% B in 20 min, 0,9 ml/min), tR = 9,0 min<br />
MALDI-TOF-MS: 999,6 m/z [M+H] +<br />
C43H67N16O12 (999,5119) m/z<br />
Negativkontrolle<br />
H-Ala-Pro-Ala-Arg-Gly-βAla-Pro-Pro-Arg-Hsl<br />
Analytische RP-HPLC (Eurosphere-Säule): (10-85% B in 20 min, 0.9 ml/min), tR = 9,2 min<br />
MALDI-TOF-MS: 975,4 m/z[M+H] +<br />
C42H71N16O12 (975,5483) m/z<br />
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