Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
8.3.10 Synthese der fluoreszenzmarkierten Peptide
8.3.10.1 Synthese des fluoreszenzmarkierten Peptids SRBS-Y241
Wie in AAV 2 beschrieben wurde das Wang-Harz mit Fmoc-Ala-OH beladen
(Beladungsdichte 0,2 mmol/g). Anschließend erfolgte nach AAV 7 die Synthese des
Peptids am Synthesizer unter Verwendung des 20µM spezial.kem chemistry files. Im
ersten Modul wurde das Harz gewaschen (Modulfolge: eGD). Die Modulfolge der
darauffolgenden Zyklen lautete BbDAFiiiCid (Single Couple, Cap./5eq.). Mit einem
abschließenden final wash (Modulfolge: Dc) wurde die automatisierte SPPS beendet.
Folgende Aminosäurebausteine wurden verwendet: Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-
Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-
OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH und
Fmoc-Tyr(tBu)-OH.
Zur Überprüfung der Synthese wurden Testabspaltungen durchgeführt. Hierzu
wurden kleine Mengen des Peptids entnommen und nach AAV 19 vorgegangen.
Fmoc-Leu-Lys-His-Asp-Thr-Asn-Ile-Tyr-Cys-Arg-His-Asp-His-Lys-Ala-OH (110→)
Analytische RP-HPLC (Eurosphere Säule): (15-100% B in 30 min, 0,9 ml/min) tR = 12,9 min
ESI-MS: 2068,5 m/z [M+H] 1+ , 1035,0 m/z [M+2H] 2+ , 690,5 m/z [M+3H] 3+ , 518,0 m/z [M+4H] 4+
Berechnet: C93H136N25O25S2 + (avarage 2068,35 m/z)
Der automatisierten SPPS folgte eine manuelle Abspaltung der N-terminalen Fmoc-
Schutzgruppe nach AAV 10. Daraufhin wurde nach AAV 9 das Fluoreszenzlabel
eingeführt und schließlich wurde das Peptid durch Behandlung mit Reagenz K (nach
AAV 20) vom Harz gespalten und aufgereinigt.
SRBS-Leu-Lys-His-Asp-Thr-Asn-Ile-Tyr-Cys-Arg-His-Asp-His-Lys-Ala-OH SRBS-Y241
Präparative RP-HPLC (Eurosphere Säule): (27-53% B in 20 min, 9,8 ml/min) tR = 11,4 min
ESI-MS: 2387,7 m/z
Ausbeute: 34% (16 mg)
Berechnet: C105H154N27O29S4 + (exacte 2385,0283 m/z, avarage 2386,7692 m/z)
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