Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

5 Anwendung der Methode
Ac-SNWSHPQFEK-Protein). Beim anschließenden Aufreinigen mittels Affinitäts-
chromatographie bindet das Tag (mit Protein) in der Biotin-Bindetasche des an der
stationären Phase immobilisierten Streptavidins. Peptide ohne Tag werden hingegen
von der Säule gewaschen. Um das Protein abschließend von der Säule zu eluieren,
wird in der Regel mit Desthiobiotin gewaschen (2,5 mM). Prinzipiell könnte das
Protein auch mit Biotin eluiert werden, eine anschließende Regeneration der Säule
wäre dann aber auf Grund der starken Bindung nicht mehr möglich. Durch
Mutationsexperimente wurde eine Streptavidinvariante namens Strep-Tactin
entwickelt, die eine noch bessere Affinität gegenüber Strep-tag zeigt. [116]
Abb. 5.1 Stereogramm eines Streptavidin/Biotin- bzw. Streptavidin/Strep-tag I- Kom-
plexes. In rot zu sehen ist Biotin, welches an Streptavidin (grün) bindet. Strep-
tag I ist in gelb dargestellt und bindet an das in blau dargestellte Strept-
avidin. [115]
Ein Vergleich der Röntgenstruktur vom Streptavidin/Strep-tag I-Komplex mit der vom
Streptavidin/Biotin-Komplex zeigte, dass Strep-tag I in der gleichen Bindungstasche
wie Biotin bindet (Abb. 5.1). Das Peptid ist jedoch nicht in der Lage, so tief in die
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