Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
für eine Stunde. Dann wäscht man mit TFA nach und stellt das Gefäß über Nacht in
den Eisschrank. Man zentrifugiert bei 1000 g bei 4°C für 45 min, dekandiert die
überstehende Lösung ab, resuspendiert das Pellet in tert -Butylmethylether und
zentrifugiert erneut. Diese Prozedur wird noch einmal wiederholt. Dann wird das
Pellet in Wasser aufgenommen und lyophilisiert. Anschließend wird das Produkt
mittels RP-HPLC präparativ aufgereinigt.
AAV 20 Peptidabspaltung mit Reagenz K
Zum Abspalten des Peptids vom Harz und der simultanen Entfernung der
säurelabilen Schutzgruppen mit Reagenz K, wird das Peptidylharz in eine
Einwegspritze eingewogen. Unmittelbar vor Gebrauch wird die Abspaltlösung
(Reagenz K) hergestellt. Diese besteht aus TFA/Thioanisol/Wasser/Phenol/EDT
(82,5:5:5:5:2,5). Das Harz wird zweimal je 3 h mit Reagenz K behandelt. Das Peptid
wird, wie bereits in AAV 19 beschrieben, ausgefällt und aufgereinigt.
130