Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

Inhaltsverzeichnis
4 ANALYTIK 47
4.1 De-novo-Sequenzierung 47
4.1.1 Massenspektrometrische Untersuchung der Bibliothek von cyclischen Peptiden mit photolabiler
Sollbruchstelle 50
4.1.2 Massenspektrometrische Untersuchung nach Anwendung der Met-Sollbruchstelle 51
4.2 Partieller Edman-Abbau (PED) 56
4.2.1 Die Mikrosequenzierung – der klassische Edman-Abbau 56
4.2.2 Partieller Edman-Abbau (PED) – die Leitersequenzierung 58
4.2.3 Erweiterung des PEDs auf OBOC-Cyclopeptidbibliotheken 59
5 ANWENDUNG DER METHODE 71
5.1 Streptavidin: Ein biologisches Modelltarget 71
5.2 Aufbau einer OBOC-Cyclopeptidbibliothek 75
5.3 Das Screening 77
5.3.1 Etablierung des Screenings 78
5.3.2 Screening der OBOC-Cyclopeptidbibliothek 86 81
5.4 Die Hitbead-Peptidsequenzen 83
5.5 Bestimmung der Bindungskonstanten 86
5.5.1 Synthese der ausgesuchten Peptidsequenzen 87
5.5.2 SPR-Experimente 88
6 SYNTHESE FLUORESZENZMARKIERTER PHOSPHOPEPTIDE 95
6.1 Darstellung von Phosphopeptiden 95
6.2 Auswahl des Fluoreszenzlabels 98
6.3 Synthese der beiden Peptide Y241 und pY241 99
6.4 Synthese der beiden Peptide Y230 und pY230 102
IV