Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

4.2.3.3 Anwendung des Konzepts auf einzelne Kugeln
4 Analytik
Wie in Abschnitt 4.2.3.1 beschrieben, konnte gezeigt werden, dass sich das Konzept
des partiellen Edman-Abbaus erfolgreich auf unser System übertragen lässt. Die
Sequenzierung des Modellpeptids gelang und die dabei beobachtete Nebenreaktion
konnte aufgeklärt werden. Bisher wurde jedoch stets eine größere Menge an
Harzkugeln zur Sequenzierung herangezogen. Nun sollte überprüft werden, ob auch
einzelne Harzkugeln für eine Sequenzbestimmung ausreichen. Der partielle Edman-
Abbau erfolgte wie bereits oben beschrieben. Vor der bromcyanvermittelten
Abspaltung der Peptidleiter von der festen Phase wurden die Harzkugeln unter einer
Stereolupe separiert und einzeln in Eppendorfcaps platziert. Für die Abspaltung
wurde eine unmittelbar zuvor hergestellte Bromcyanlösung in die Caps pipettiert. Die
Kugeln liess man darin über Nacht quellen. Die jetzt in der Lösung vorhandene
Peptidleiter wurde anschließend vom Lösungsmittel befreit. Der Rückstand wurde in
MALDI-Lösungsmittel aufgenommen, auf das Target geladen und MALDI-TOF-
Massenspektren gemessen. Zusätzlich zu den Proben wurde immer ein Spot auf
dem Target als Referenz mit MALDI-Solvent/Matrix (α-Cyano-4-Hydroxyzimtsäure,
CHCA) bestückt. Im ersten Versuch wurden für Matrix-Referenz und Probe
(abgespaltene Peptidleiter) analoge Spektren erhalten.
Abb. 4.15 Mechanismus der Reduktion von Sulfoxid mit NH4I in TFA unter Zusatz von
Dimethylsulfid in Peptiden. [103]
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