Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

4 Analytik
Möglicherweise könnte Methionin zu Methioninsulfoxid oxidiert worden sein. Die
Oxidation kann ungewollt während der Kettenverlängerung der SPPS, der Lagerung
oder des partiellen Edman-Abbaus erfolgen. Da Methioninsulfoxid nicht für die BrCN-
Spaltung zugänglich ist, bliebe die Peptidleiter an der festen Phase gebunden. Durch
Behandlung des Harzes mit einer Lösung aus Ammoniumiodid in TFA bei 0°C unter
Zusatz von Dimethylsulfid kann Methioninsulfoxid zu Methionin reduziert werden
(Abb. 4.15). [103-105] Eine solche Behandlung unmittelbar vor der Abspaltung ergab
jedoch keine Verbesserung.
Zur Überprüfung, ob das Peptid vom Harz gespalten werden kann, sich im MALDI-
Lösungsmittel löst und anschließend mittels MALDI-TOF-MS nachgewiesen werden
kann, wurde das intakte Peptid, also ohne vorherigen PED, von einzelnen
Harzkugeln abgespalten. In allen Fällen konnte anschließend ein Massenspektrum
des intakten Peptids erhalten werden. Durch den partiellen Edman-Abbau verringert
sich die Menge des Peptids, welche anschließend zum Nachweis genutzt werden
kann. Vermutlich stößt man dabei an die Nachweisgrenze des verwendeten
Massenspektrometers. Auch bei den hier beschriebenen Messungen wurde als
Referenz eine Messung ohne Peptidprobe (nur Lösungsmittel und Matrix)
durchgeführt. Vergleicht man die Probenspektren mit dem Matrixspektrum, so fällt
auf, dass in den Probenspektren ein sehr hoher Anteil an Matrix-Hintergrund, also
Signale, die von der Matrix bzw. Matrixclustern stammen, enthalten ist.
Keller et al. [106] berichten von solchen Matrix-Hintergrund-Problemen, wenn eine
Analytlösung sehr verdünnt und/oder eine hohe Verunreinigung der Probe durch
Salze vorliegt. Die Matrix- und Matrixcluster-Signale werden deutlich verstärkt,
während die Analytsignale geschwächt werden. Da sich der Matrix-
Hintergrundbereich von α-Cyano-4-Hydroxyzimtsäure (CHCA) bis zu einem
Massebereich von ~2000 m/z erstrecken kann, kann darunter die komplette
Peptidleiter „verborgen“ liegen. Keller weist darauf hin, dass dieses Problem nicht
verhindert werden kann. Eine Umkristallisierung der CHCA aus Ethanol vor dem
Gebrauch als Matrix kann die Erscheinung der Hintergrundsignale etwas dämpfen.
Xu führt mit 3,4-Diaminobenzophenon eine neue Matrix ein, die nach seiner
Beschreibung weniger anfällig ist für dominante Matrix-Hintergrund-Signale. [107]
Schlosser schlägt als Matrix eine Mischung aus gleichen Teilen CHCA und
2,5-Dihydroxybenzoesäure (DHB) vor. [108]
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