Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

1 Einleitung
Split-Mix-Protokoll. Nach dem Screening werden die positiv getesteten Kugeln
aussortiert. Die an der Kugel gebundene Peptidleiter muss nur noch abgespalten
werden und steht dann zur massenspektrometrischen Analyse zur Verfügung. Aus
den erhaltenen Massenspektren kann nun die Sequenz ausgelesen werden. Der
große Nachteil dieser Methode ist, dass das One-Bead-One-Compound Prinzip
verloren geht, da sich beim Screening die ganze Peptidleiter auf der Kugel befindet
und somit alle „Leitersprossen“ als potentielle aktive Verbindungen zur Verfügung
stehen. In späteren Veröffentlichungen [17] versuchte man, dieses Problem durch eine
Aufteilung der Kugel in äußere und innere Schale (biphasic beads) zu umgehen. Die
Synthese wird dabei so modifiziert, dass beim Screening der Bibliothek die eigentlich
zu testende Substanz dem Target/Rezeptor auf der äußeren Schale angeboten wird,
während sich die zur Verschlüsselung mitsynthetisierte Peptidleiter im Innern der
Kugel befindet.
Ganz ohne Verschlüsselung kommen hingegen tandem-MS, Edman-Abbau und die
Leitersequenzierung aus. Zur rein massenspektrometrischen Sequenzierung
(tandem-MS) von aktiven Peptiden aus OBOC-Bibliotheken wird das Peptid vor der
Probenvorbereitung von der Kugel gespalten. [18] Während der massenspektro-
metrischen Charakterisierung wird das intakte Peptidion im Massenspektrometer
isoliert und anschließend fragmentiert. Aus den erhaltenen Peptidfragment-
ionsignalen können dann Rückschlüsse auf die Peptidsequenz gezogen werden. Für
die Durchführung solcher Experimente benötigt man jedoch ein speziell zur
Sequenzierung ausgestattetes Massenspektrometer, das die Möglichkeit bietet,
Peptidionen zu isolieren und zu fragmentieren. [19-23] Während meiner Diplomarbeit
konnte ich zeigen, dass harzgebundene Peptide mittels MALDI-FTICR-MS/MS
sequenzierbar sind. [24] Durch den Einsatz eines photolabilen Linkers erfolgte die
Abspaltung des Peptids vom Harz durch den Laserstrahl der MALDI-Quelle, wodurch
ein vorheriges Abspalten vom Harz entfiel. Die Gruppe um Albericio zeigte eine
Sequenzierung mittels MALDI-TOF/TOF-MS. [25] Die Abspaltung des Peptids erfolgte
hierbei direkt auf dem MALDI-Target durch Einwirkung von Ammoniakdampf
(Spaltung des HMBA-Linkers). Zur weiteren Probenpräparation musste lediglich
Matrix addiert werden.
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