Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

5 Anwendung der Methode
Bindungstasche einzudringen. Oder aus Sicht des Biotins ausgedrückt, der
Imidazolidinonring des Biotins passt perfekt in die Bindungtasche. Strep-tag ist aber
in der Lage, Biotin nachzuahmen. Das Carboxylamid aus der Seitenkette von
Glutaminsäure (Gln/Q) an Position 6 nimmt dabei den Platz des Biotin-
Schwefelatoms ein. Der Imidazolring in der Seitenkette von Histidin (His/H) an
Position 4 übernimmt die Position des biotinylischen Valerylcarboxylats. Außerdem
konnte gezeigt werden, dass zwischen der peptidischen Carboxylatgruppe und der
Guanidiniumgruppe des Arginins an Position 84 im Streptavidin eine Salzbrücke
ausgebildet wird.
In Tabelle 5 sind Literaturwerte der Bindungskonstanten verschiedener HPQ-Peptide
zu Streptavidin aufgelistet. Den Daten liegen unterschiedliche Experimente zu
Grunde.
Weber [117] und auch die Gruppe um Skerra [115] führten Isotherme-Titrations-
kalorimetrie (ITC) Experimente zur Bestimmung der Bindungskonstanten durch. Die
von Weber untersuchten Peptide wurden von Devlin [112] aus phage-display-
Bibliotheken selektiert. Die in der Gruppe von Skerra untersuchten strep-tagI Peptid-
sequenz gingen ebenfalls durch Selektion aus einer phage-display-Bibliothek
hervor. [114] Von deren Sequenz abgeleitet erfolgte eine Spot-Peptidbibliotheks-
Synthese mit anschließendem kompetitivem Screening, daraus ging Strep-tag II
[114, 115]
hervor.
Gieble [118] und Chang [119] führten zur Bestimmung der Bindungskonstanten SPR-
Experimente durch. Auch die von Giebel untersuchten Peptidsequenzen wurden
mittels phage-display-Verfahren ausfindig gemacht. Bei den SPR-Experimenten
wurden die zu untersuchenden Peptide immobilisiert und Streptavidin als Analyt
verwendet. Die SPR-Experimente gestalteten sich jedoch schwierig; von sechs der
acht untersuchten Peptide konnte keine Bindungskonstante bestimmt werden. Als
Grund hierfür nennen die Autoren eine zu geringe Bindungsaffinität der Peptide. Die
von Chang untersuchte Peptidsequenz wurde aus einer iterativen Dekonvolutions-
Bibliothek mit einem an ELISA angelehnten Screening ermittelt. [120] Für die
Bestimmung der Bindungskonstante immobilisierte Chang Streptavidin auf dem
SPR-Sensorchip und verwendete die zu untersuchenden Peptide als Analyt. Die von
ihm erhaltenen Ergebnisse verdeutlichen evident den Zusammenhang von Struktur
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