Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

Fmoc-SPPS
am ABI433A
Fmoc
N
H
O
6 Synthese fluoreszenzmarkierter Phosphopeptide
Wang
1) 20% Piperidin
2) 5eq. Xaa,
5eq. HOBt/HBTU-Lsg,
20eq. DIPEA
3) Ac 2O/HOBt und DIPEA
Fmoc-Ile-Tyr( t Bu)-Glu(O t Bu)-Glu(O t Bu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(O t Bu)
Fmoc NH
O
N
O
O
t BuO
O
manuelle
Fmoc-SPPS
Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Thr( Wang
tBu)-Ala-Ala-Ser( Me,MePro)-Ile-Tyr( tBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(OtBu) 121
114
Wang
1) 20% Piperidin
2) 5eq. Fmoc-Ala-Ser( Me,Me Pro)-OH
5eq. PyBOP/HOBt-Lsg,
10eq. DIPEA
3) 10% Ac 2OinDMF
Ile-Tyr( Wang
tBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(OtBu) 120
Fmoc-SPPS
am ABI433A
1) 20% Piperidin
2) 5eq. Xaa,
5eq. HOBt/HBTU-Lsg,
20eq. DIPEA
3) Ac 2O/HOBt und DIPEA
1) 20% Piperidin
2) 4eq. SRBS-Chlorid
6eq. DIPEA
3) Reagenz K
SRBS-Pro-Arg-Thr-Ala-Ala-Ser-Ile-Tyr-Glu-Glu-Leu-Leu-Lys-His-Asp-OH SRBS-Y230
Abb. 6.9 Synthese des fluoreszenzmarkierten Peptids SRBS-Y230 unter Verwendung
eines Pseudoprolin-Dipeptids. Zur besseren Steuerung der Synthese wurde
das Peptid teilweise manuell synthetisiert.
Der Syntheseweg ist in Abb. 6.9 aufgeführt. Die ersten neun Aminosäuren der
Peptidkette wurden, wie bereits beschrieben, am Synthesizer verknüpft. Die
darauffolgende Abspaltung der N-terminalen Fmoc-Schutzgruppe von Peptid 119
erfolgte manuell. Die Vollständigkeit der Entschützungsreaktion wurde mittels UV-
Spektroskopie überprüft. Anschließend wurde, ebenfalls manuell, das Pseudoprolin-
Dipeptid durch PyBOP/HOBt-Aktivierung gekuppelt. Auch dieser Reaktionsschritt
wurde auf seine Vollständigkeit hin überprüft. Hierzu wurden der Kaiser [142] - und
TNBS [143] -Test durchgeführt. Nach zusätzlicher Acetylierung wurde die Synthese in
automatisierter Form fortgesetzt. Leider zeigt sich im UV-Monitoring erneut ein
Syntheseeinbruch zwischen Thr und Arg (ähnlich wie in Abb. 6.7 Einbruch II).
Unmittelbar nach der Synthese am Synthesizer wurde eine Testabspaltung von 121
119
105