Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
8.3.8.4 Synthese der Bibliothek 86
Die Festphasensynthese der Bibliothek 86 erfolgte an aminofunktionalisiertem
TentaGel-Harz (MB 300 bzw S-NH2). Zur ersten Aminosäurenkupplung wurden 5 eq.
Fmoc-Met-OH, 3 eq. Boc-Met-OH, 7,8 eq. HBTU, 8 eq. HOBt und 16 eq. DIPEA
verwendet und entsprechend AAV 1 verfahren. Es ergab sich eine Beladungsdichte
von 0,16 mmol/g. Für die anschließende Synthese der Massenspacer-Sequenz
wurden die folgenden Aminosäurebausteine verwendet: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-
Pro-OH, Fmoc-βAla-OH und Fmoc-Glu(OAll)-OH. Zur Anknüpfung der Aminosäuren
wurde AAV 3 verwendet. Das anschließende capping erfolgte nach AAV 5. Die
Abspaltung der N-terminalen Fmoc-Schutzgruppe verlief wie in AAV 10 beschrieben.
Die Vollständigkeit der Fmoc-Abspaltung wurde mittels UV-Spektroskopie überprüft
und gegebenenfalls wiederholt. Für die anschließenden kombinatorischen
Kupplungsschritte wurde das Harz vor der Aminosäurenkupplung entsprechend der
Anzahl an Kupplungen in PE-Spritzen aliquotiert. Die separaten Kupplungen
erfolgten ebenfalls wie in AAV 3 beschrieben. Nach erfolgreicher Umsetzung wurden
die aliquoten Harzmengen vereinigt und nach AAV 5 gecappt. Es folgte die Fmoc-
Entschützung nach AAV 10; auch hierbei wurde die Abspaltlösung mittels UV-
Spektroskopie untersucht. Nach erfolgreicher Freisetzung des N-Terminus wurde
das Harz erneut aufgeteilt. In der kombinatorischen Synthese kamen folgende
Aminosäuren zum Einsatz: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Glu(O t Bu)-OH,
Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser( t Bu)-OH,
Fmoc-Thi-OH und Fmoc-Trp(Boc)-OH. Nach der letzten Kupplung mit Boc-
Lys(Alloc)-OH wurde das Harz gut mit DMF und DCM gewaschen und im Vakuum
getrocknet. Die Abspaltung der Alloc- und Allyl-Schutzgruppe erfolgte nach AAV 11.
Daraufhin wurde wie in AAV 8 beschrieben unter Verwendung von PyBOP cyclisiert.
Zur Lagerung wurde die mit Peptidylharz bestückte Einwegspritze in einem mit Argon
gefluteten Schraubdeckelglas im Kühlschrank aufbewahrt. Die Entfernung der
säurelabilen Schutzgruppen erfolgte unmittelbar vor dem Einsatz im biologischen
Test nach AAV 12.
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