Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
Kupplung durchgeführt. Die Vollständigkeit der Reaktion wird durch Test auf freie
Amine (AAV 4) überprüft. Abschließend wird das Harz zehnmal mit DMF und dreimal
mit DCM gewaschen.
Das Vorgehen zur Aktivierung mit PyBOP/HOBt erfolgt analog.
AAV 4 Vollständigkeit der Kupplungsschritte – Test auf primäre Amine
Nach unvollständiger Kupplung verbleibende primäre Amine werden mittels
Kaisertest und/oder TNBS-Test detektiert.
Kaisertest [142]
Hierzu entnimmt man eine Spatelspitze Harz und überführt diese in ein Eppendorf-
Cap. Man gibt je drei bis fünf Tropfen der Lösungen1 bis 3 zum Harz und erwärmt für
fünf Minuten auf 100°C im Wasserbad. Färben sich die Kugeln bzw. die Lösung blau,
sind noch primäre Amine vorhanden.
Lösung 1: 5 g Ninhydrin in 100 ml Ethanol
Lösung 2: 2 ml 0.1 mM KCNaq. in 98 ml Pyridin
Lösung 3: 80 g Phenol in 20 ml Ethanol
TNBS Test [143]
Einige wenige Harzkugeln werden auf einer Petrischale platziert. Nun werden die
Kugeln mit je einem Tropfen 10% DIPEA in DMF und 1% TNBS in DMF bedeckt.
Nach fünf Minuten wird die Lösung mit einem Wischtuch vorsichtig entfernt und die
Kugeln unter der Stereolupe betrachtet. Bei Anwesenheit von primären Aminen
färben sich die Kugeln gelb bis orange.
AAV 5 Capping der freien Aminofunktionen
In einer Einwegspritze mit eingesetzter PE-Fritte lässt man das Harz in DMF (5 ml für
1 g Harz) quellen. Man saugt ab und behandelt das Harz mit 10% Acetanhydrid in
DMF (1x10 min und 2x5 min). Anschließend wird zehnmal mit DMF und zweimal mit
DCM gewaschen.
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