Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

AAV 9 Einführung des Fluoreszenzlabels
8 Experimenteller Teil
Zur Vorbereitung der Reaktion wird das Harz zunächst ausführlich gewaschen und
anschließend am Vakkuum getrocknet. Unmittelbar vor Gebrauch wird eine Lösung
aus 4 eq. Sulforhodamin-B-sulfonylchlorid (SRBS-Chlorid), 6eq. DIPEA in DMF
hergestellt, zum mit Stickstoff geflutetem Harz aufgezogen und über Nacht
ge¬schüttelt. Anschließend wird das Harz zuerst mit DMF(10x1 min) und dann mit
DCM (10x1 min) gewaschen. Daraufhin wird es durch Waschen mit Methanol (2x4
min) geschrumpft und abschließend am Vakuum getrocknet.
AAV 10 Abspaltung der Fmoc-Schutzgruppe
Das Harz wird in eine Einwegspritze mit eingesetzter PE-Fritte eingewogen, mit DMF
gequollen und abgesaugt. Daraufhin folgt eine Behandlung der Harzkugeln mit 20%
Piperidin in DMF (1x3 min und 3x5 min). Die abgetrennte Abspaltlösung wird
aufbewahrt. Das Harz wird noch fünfmal mit DMF gewaschen und die Waschlösung
mit der Abspaltlösung vereinigt. Schließlich wird noch fünfmal mit DMF und fünfmal
mit DCM gewaschen.
Bei bekanntem Volumen der Abspaltlösung kann mittels UV-Spektroskopie die
abgespaltene Fmoc-Gruppe quantifiziert werden.
AAV 11 Abspaltung der Allyl- bzw. Alloc-Gruppe
Das Harz wird in eine Einwegspritze mit eingesetzter PE-Fritte eingewogen, dreimal
mit DCM gewaschen und anschließend an der Line getrocknet (dazu gibt man die
Spritze mit Harz in einen Schlenkkolben). Das getrocknete Harz wird direkt vor der
Abspaltung mit Stickstoff geflutet.
Variante A – unter Einsatz eines Boran-Dimethylamino Komplexes:
Aus 0,4 eq. Pd(PPh3)4 und 7,5 eq. Boran-Dimethylamino Komplex (bezogen auf die
Anzahl der Allyl- bzw. Alloc-Gruppen im Peptid) und DCM wird eine Suspension
hergestellt, diese zum Harz aufgezogen und geschüttelt. Nach 20 min wird die
Lösung erneuert und weitere 20 min geschüttelt. Nach Absaugen der Lösung wird
zehnmal mit DMF und zehnmal mit DCM gewaschen.
Variante B – durch Zugabe von N,N’-Dimethylbarbitursäure (DMB): [123]
Zum mit Stickstoff gefluteten Harz gibt man eine 0,2 M Lösung aus DMB in
trockenem DCM (8,3 eq bezogen auf die zu entschützende Allyl- bzw. Alloc-Gruppe.)
125