Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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8 Experimenteller Teil<br />
8.5 On-bead-Screening<br />
Verwendete Reagenzien<br />
AP-Streptavidin-Konjugat Sigma S 2890<br />
BCIP/NBT-Färbetabletten Sigma B 5655<br />
Biotin-N-Hydroxysuccinimidoester ICN 150048<br />
Tween 20 Fluka 93773<br />
Gelatine K-classic (Kaufland)/ Haushaltsgelatine<br />
Geräte<br />
Stereolupe Olympus SZ 4045 TR<br />
Kamera Olympus Camedia C-7070 wide zoom<br />
8.5.1 Zusammensetzung der Puffer und Lösungen für das<br />
Screening:<br />
TBS-Puffer (Tris-gepufferte Salzlösung)<br />
Zur Herstellung des TBS-Puffers wurden 3,94 g Tris·HCl (100 mM), 1,46 g NaCl<br />
(100 mM) und 254,1 mg MgCl2·6 H2O (5 mM) in 150 ml Wasser gelöst, durch Zugabe<br />
von 1 N NaOH (20 ml) auf pH 9,0 eingestellt und anschließend im einem<br />
Messzylinder auf 250 ml mit Wasser aufgefüllt.<br />
PBS-Puffer (Phosphat-gepufferte Salzlösung)<br />
Zur Herstellung des PBS-Puffers wurden 2,865 g Na2HPO4·12 H2O (8 mM), 234,6<br />
mg NaH2PO4·2 H2O (1,5 mM) und 8,164 g NaCl (139,7 mM) in ca. 900 ml Wasser<br />
gelöst. Durch Zugabe von NaOH wurde der pH-Wert auf 7,4 eingestellt und<br />
anschließend im 1 l Messkolben mit Wasser bis zur Markierung aufgefüllt.<br />
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