Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

3 Sollbruchstellen
Die Synthese des linearen Vorläuferpeptids 27 erfolgte unter Standard-Fmoc-SPPS
am Peptidsynthesizer. Der Syntheseverlauf wurde mittels Leitfähigkeitsmessung der
Fmoc-Abspaltlösung verfolgt. Nach Entschützung des N-Terminus und der
Carboxylgruppe der Glutaminsäureseitenkette erfolgte zwischen diesen die
Cyclisierung unter Verwendung von PyBOP. Die Reaktionsbedingungen können der
Abb. 3.14 entnommen werden. Zur Untersuchung der Sollbruchstelle wurde das
harzgebundene Cyclopeptid 31 anschließend über Nacht mit Bromcyan in wässrig
saurer Lösung behandelt. Alle Schritte wurden mittels RP-HPLC und nachfolgender
Massenspektrometrie analysiert (Abb. 3.15). In den Chromatogrammen der Peptide
28, 30 und 32 wurden je zwei Hauptpeaks beobachtet. Die massenspektrometrische
offline-Charakterisierung ergab, dass es sich bei den Peaks mit niedrigerer
Retentionszeit (17,921 min, 13,395 min und 13,710 min) jeweils um das
entsprechende Peptid handelte, bei dem Methionin oxidiert vorliegt. Aus den
Chromatogrammen in Abb. 3.15 wird ebenfalls ersichtlich, dass das cyclische Peptid
32 durch Behandlung mit BrCN zum linearen Peptid 33 umgewandelt werden kann.
Methionin ist somit als Sollbruchstelle in cyclischen Peptiden durchaus geeignet.
Die daran anschließenden massenspektrometrischen Sequenzierungsexperimente
sind in Abschnitt 4.1.2 ausführlich beschrieben. Wie dort ausführlich erläutert stellte
sich die rein massenspektometrische Sequenzierung als ungeeignet heraus, somit
erübrigte sich die Anwendung einer simultanen Ringöffnung und Harzspaltung.
Der partielle Edman-Abbau (PED) zeigte sich dagegen als geeigneter zur
Sequenzierung (eine ausführliche Beschreibung hierzu befindet sich in Kapitel 4).
Dies stellt jedoch besondere Anforderungen an den Linker. Ein simultanes
Peptidringöffnen und Abspalten des Peptides vom Harz ist bei dieser Methode nicht
mehr möglich. Alle Schritte müssen festphasengebunden vonstatten gehen und erst
unmittelbar vor der Analytik darf das Peptid vom Harz gespalten werden.
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