Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
8.3.4 Synthese des Peptids 51/52 zur Stabilitätsuntersuchung des
Glykolamid-Linkers und des HMBA-Linkers
Zur Herstellung von 0,1 mmol Fmoc-Ala-Acetamid (oder besser Glykolamidester)-
Harz wurden 312,5 mg (0,1 mmol/ 0,32 mmol/g) TG-S-NH2-Harz in eine
Einwegspritze mit PE-Fritte eingewogen. Zunächst wurde das Harz viermal 2
Minuten mit DCM, zweimal 5 Minuten mit 5% DIPEA in DCM und viermal 2 Minuten
mit DCM vorbehandelt. Bromessigsäure (83,4 g, 0,6 mmol) wurde in 1 ml DCM
gelöst und auf 0°C gekühlt. DCC (61,9 mg, 0,3 mmol) wurde in 0,4 ml DCM gelöst,
zur eiskalten Bromessigsäurelösung gegeben und 15 Minuten bei 0°C gerührt. Der
ausgefallene Dicyclohexylharnstoff wurde abfiltriert, die Lösung zum vorbehandelten
Harz aufgezogen und 15 Minuten bei RT geschüttelt. Anschließend wurde die
Lösung in ein Becherglas gedrückt, mit 17,4 µl DIPEA (0,1 mmol) versetzt und erneut
zum Harz aufgezogen. Nach 75 Minuten wurde das Harz wie folgt gewaschen: DCM
(4x2 min), DMF (4x2 min), DCM (5x2 min), DMF (1x2 min, 2x10 min). Fmoc-Ala-OH
(93,4 mg/ 0,3 mmol) und CsI (7,8 mg/ 0,03 mmol) wurden in ein Becherglas
eingewogen und in 2 ml DMF und DIPEA (52,2 µl/ 0,3 mmol) gelöst. Nachdem sich
alles vollständig gelöst hatte (ca. 5 Minuten), wurde die aktivierte Aminosäure-
Lösung zum Bromacetamid-Harz aufgezogen und bei RT über Nacht geschüttelt.
Nach dem Waschen (10x1 Minute mit DMF, 5x1 Minute mit DCM) wurde das Harz
am Vakuum getrocknet und nach AAV 6 die Beladungsdichte bestimmt. Es ergab
sich eine Beladungsdichte von 0,322 mmol/g.
Das HMBA Harz wurde mit der MSNT-Methode nach AAV 2 beladen (Beladungs-
dichte 0,18 mmol/g).
Die Synthese der Peptide erfolgte nacheinander, aber analog zueinander, am
Peptidsynthesizer nach AAV 7 im 20 µmol Ansatz unter Verwendung des UV-
Monitorings. Nach der automatisierten Elongation erfolgte die Abspaltung der
N-terminalen Fmoc-Schutzgruppe nach AAV 10, bevor nach AAV 5 der N-Terminus
acetyliert wurde. Die Abspaltung der säurelabilen Schutzgruppen der Seitenketten
erfolgte nach AAV 12. Die Abspaltung des Peptids vom Harz erfolgte schließlich
nach AAV 16.
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