Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

3 Sollbruchstellen
Neben der Bromcyanspaltung zur Fragmentierung von Polypeptiden findet man in
der Literatur auch zahlreiche Beispiele, in denen Methionin als Linkergruppe in der
SPPS eingesetzt wurde. [16, 21, 27, 46-50] Nach der Standard-Fmoc-SPPS wird das
Peptid dabei üblicherweise durch Behandlung mit einer Lösung, bestehend aus
BrCN in 70% wässriger TFA (70 mg/ml), vom Harz abgespalten.
Abb. 3.13 Cyclisches Peptid mit Methionin als Linker zum Harz und Sollbruchstelle im
Peptidzyklus. Durch Behandlung mit BrCN wird das Peptid vom Harz
gespalten und der Ring geöffnet. Man erhält ein lineares Peptid in Lösung.
Inspiriert von diesen Arbeiten kam der Gedanke auf, Methionin nicht nur als Linker,
sondern zusätzlich als Sollbruchstelle im cyclischen Peptid zu verwenden. Wird ein
solches System einer BrCN-Behandlung ausgesetzt, so sollte simultan das Peptid
vom Harz gespalten und der peptidische Ring geöffnet werden. Man erhält ein
lineares Peptid in Lösung, welches nun einer Sequenzierung unterzogen werden
kann.
Um das Potential von Methionin als Sollbruchstelle im Zyklus zu überprüfen, wurde
zunächst Peptid 27-33 an SieberAmid-TentaGel-Harz synthetisiert (Abb. 3.14). Im
Hinblick auf eine spätere Sequenzierung des Peptids mittels Massenspektrometrie,
wurde zwischen dem Peptidzyklus und dem Trägerharz eine kurze Massenspacer-
sequenz, bestehend aus -βAla-Pro-Pro-Arg-, synthetisiert. Der Spacer nutzt in
zweierlei Hinsicht. Erstens bringt er die zur Sequenzierung notwendigen Peptid-
fragmente in einen Massenbereich größer 500 m/z und somit über den
Massenbereich der Matrix-Hintergrund-Signale im MALDI-Experiment. Zum Zweiten
wird durch die Anwesenheit von Arginin eine positive Ladung im Peptid gesichert,
welche für die massenspektrometrische Detektion nötig ist.
27