Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

6 Synthese fluoreszenzmarkierter Phosphopeptide
In Abb. 6.11 ist der Syntheseweg des fluoreszenzmarkierten Phosphopeptids
SRBS-pY230 dargestellt. Aufgrund der Erfahrungen bei der Synthese von Peptid
115 und SRBS-Y230 wurden nur die ersten fünf Aminosäuren der Peptidkette am
Synthesizer verknüpft. Die weitere Synthese wurde manuell durchgeführt. Dabei
wurden alle Fmoc-Abspaltschritte mittels UV-Spektroskopie und alle
Kupplungschritte mittels Kaiser [142] - und TNBS [143] -Test auf ihre Vollständigkeit hin
überprüft. Da sich in den vorhergehenden Synthesen die letzten beiden
Kettenverlängerungsschritte (Arg und Pro) als problematisch erwiesen, wurde bei
deren Kupplung das reaktivere PyAOP als Aktivierungsreagenz verwendet. [144] Die
Einführung des Fluoreszenzlabels, die Abspaltung vom Harz, sowie die weitere
Aufarbeitung erfolgte analog zu den bereits beschriebenen Peptiden SRBS-Y230,
SRBS-pY241 und SRBS-Y241. Das fluoreszenzmarkierte Peptid SRBS-pY230
wurde nach präparativer RP-HPLC mit einer Ausbeute von 14% erhalten.
Fmoc-SPPS
am ABI433A
Fmoc
N
H
O
Wang
1) 20% Piperidin
2) 5eq. Xaa,
5eq. HOBt/HBTU-Lsg,
20eq. DIPEA
3) Ac 2O/HOBt und DIPEA
Fmoc-Glu(O t Bu)-Glu(O t Bu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(O t Bu)
manuelle
Fmoc-SPPS
t BuO
O
114
1) 20% Piperidin
2) 5eq. Xaa
5eq. PyBOP/HOBt-Lsg,
10eq. DIPEA
3) 10% Ac 2OinDMF
Fmoc-Thr( Wang
tBu)-Ala-Ala-Ser( Me,MePro)-Ile-Tyr[PO(OBzl)]-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(OtBu) 123
manuelle
Fmoc-SPPS
1) 20% Piperidin
2) 5eq. Fmoc-Arg(Pbf)-OH
5eq. PyAOP/HOAt-Lsg,
10eq. DIPEA
3) 10% Ac 2OinDMF
Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Thr( Wang
tBu)-Ala-Ala-Ser( Me,MePro)-Ile-Tyr[PO(OBzl)]-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(OtBu) 124
1) 20% Piperidin
2) 4eq. SRBS-Chlorid
6eq. DIPEA
3) Reagenz K
Wang
122
SRBS-Pro-Arg-Thr-Ala-Ala-Ser-Ile-Tyr[PO(OH) 2]-Glu-Glu-Leu-Leu-Lys-His-Asp-OH
SRBS-pY230
Abb. 6.11 Syntheseweg des fluoreszenzmarkierten Phosphopeptids SRBS-pY230.
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