Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

3 Sollbruchstellen
Abb. 3.9 Denkbarer Reaktionsmechanismus der photolytischen Spaltung. [38]
Für eine kinetische Untersuchung der photolytischen Sollbruchstelle wurde Peptid 9
herangezogen. Durch Behandlung des Harzes mit 1% TFA wurde das Boc-
geschützte Peptid 9 von der festen Phase gespalten und anschließend
gefriergetrocknet. Der Rückstand wurde in einem Lösungsmittelgemisch aus Aceto-
nitril (66,6%), Methanol (16,6%), Wasser (16,3%) und Ameisensäure (0,3%) (v/v)
gelöst und in ein HPLC-Probegefäß überführt. Anschließend erfolgte eine
Bestrahlung der Peptidlösung mit UV-Licht (366 nm) für 20, 60, 120, 180, 240 und
360 Sekunden. Ein hypothetischer Reaktionsmechanismus kann Abb. 3.9
entnommen werden. [38] Nach Ablauf der Bestrahlungsdauer wurden RP-HPLC-
Chromatogramme von je 10 µl Peptidlösung aufgenommen. In Abb. 3.10 ist eine
Auswahl der erhaltenen Chromatogramme dargestellt. Vor der Bestrahlung zeigt das
Chromatogramm den Doppelpeak (rot hervorgehoben) des cyclischen Peptids 9 bei
Retentionszeiten von 13,3 und 13,6 min. Im Verlauf der Reaktion nimmt dieser
Eduktpeak, wie erwartet, ab. Synchron zu seinem Verschwinden, wurde die
Entstehung eines Produkts (blau hervorgehoben) bei einer Retentionszeit von 12,6
min beobachtet, dessen UV-Spektrum leicht bathochrom verschoben ist. Das neu
gebildete Produkt zeigte das Phänomen des Doppelpeaks nicht, was nicht weiter
verwunderte, da während der Photoreaktion das Chiralitätszentrum verloren geht. Mit
zunehmendem Reaktionsverlauf ist eine weitere Produktbildung (tR 13,2 min, grün
hervorgehoben) zu erkennen. Da zwischen den einzelnen Bestrahlungszyklen immer
ein HPLC-Lauf erfolgte, lag die Vermutung nahe, dass es sich hierbei nicht um eine
photolytische Reaktion, sondern um eine Zersetzung des photolytischen Spalt-
produktes handeln könnte. Deshalb wurde die Peptidlösung nach der letzten
22