Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

3 Sollbruchstellen
Um die Eignung des Arylhydrazin-Linkers für unsere Zwecke zu untersuchen, wurde
zunächst nach optimalen Abspaltbedingungen gesucht. Da die Abspaltung der
Peptidleiter (durch partiellen Edman-Abbau an der festen Phase erzeugt) als letzter
Schritt vor der massenspektrometrischen Charakterisierung erfolgen soll, wurde
versucht, über das Nucleophil beim Abspalten ein Bromisotopenlabel einzuführen.
Durch das somit im Molekül enthaltene charakteristische Isotopenverteilungmuster,
wird die Auswertung der Massenspektren erleichtert. Zunächst wurde das
kommerziell erhältliche Fmoc-geschützte Arylhydrazin-Harz 34 mit Fmoc-βAla-OH
beladen. Zum Drosseln der Beladungsdichte wurde eine Mischung aus Fmoc- und
Boc-βAla-OH (1:1) verwendet. Für die zu untersuchende Abspaltung wurde der
Linker durch Behandlung mit einer Lösung aus NBS, Pyridin und DCM aktiviert und
anschließend mit verschiedenen Nucleophilen umgesetzt (Abb. 3.18).
Abb. 3.18 Das kommerziell erhältliche NovaSyn-TG-Harz 34 wurde mit Aminosäure
beladen. Zur Optimierung der Abspalt-Bedingungen wurde das Harz nach
oxidativer Aktivierung mit folgenden Nucleophilen behandelt: Methanol (35), 2-
Brombenzylalkohol (36), 4-Brombenzylalkohol (37) und 4-Bromanilin (38).
Eine RP-HPLC Analyse der NBS-Aktivierungslösung ergab, dass das Harz während
und nach der Aktivierung äußerst hydrolyseempfindlich ist. Bei Verwendung von
nicht ausreichend wasserfreien Reagenzien wurde die Aminosäure bereits vor
Zugabe des Nucleophils als freie Säure vom Harz abgespalten. Unter Verwendung
der Alkohole 35-37 als Nucleophile zeigte die Analyse der Abspaltlösungen neben
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