Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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3 Sollbruchstellen<br />
Zur anschließenden Untersuchung der BNPS-Skatol-vermittelten Trp-Xaa Ring-<br />
öffnung wurden vier gleich große Aliquote des Peptidharzes 63 (~1,4 µmol) unter-<br />
schiedlichen Reaktionsbedingungen ausgesetzt. In allen Fällen wurde das Harz mit<br />
2,8 eq. BNPS-Skatol (3,5 mM Lösung in 88% Essigsäure) behandelt, während<br />
Reaktionszeit und Temperatur jedoch variierten. Nach Reduktion von möglicherweise<br />
oxidierten Methionin-Resten wurde das Peptid durch Behandlung mit saurer BrCN-<br />
Lösung von der festen Phase gespalten (Abb. 3.25). Mittels MALDI-TOF-MS wurde<br />
der Erfolg der Spaltung bewertet. Wie in Tabelle 3 aufgeführt, wurde nach<br />
sechsminütiger Reaktionszeit in beiden Fällen eine Umsetzung zum gewünschten<br />
Produkt (Peptid 65) beobachtet. Jedoch wurde zudem noch Edukt (cyclisches Peptid<br />
64) nachgewiesen. Der jeweils intensivste Peak in beiden Massenspektren konnte<br />
der Oxotryptophan-Zwischenstufe 55 zugeordnet werden. Die Verlängerung der<br />
Reaktionszeit auf 60 Minuten führte leider nicht zur selektiven Umsetzung zum<br />
gewünschten Produkt.<br />
Reaktions-<br />
zeit<br />
6min RT<br />
6min 47°C<br />
Tabelle 3 Untersuchung der BNPS-Skatol-vermittelten Trp-Xaa-Spaltung bei unter-<br />
Temperatur<br />
schiedlichen Reaktionsbedingungen anhand von Peptid 63.<br />
MALDI-TOF-MS<br />
m/z [Int.]<br />
1398,6 m/z [47%]<br />
1414,6 m/z [87%]<br />
1430,6 m/z [54%]<br />
1398,5 m/z [54%]<br />
1414,5 m/z [78%]<br />
1430,5 m/z [36%]<br />
60min RT 1478,5 m/z [52%]] unklar<br />
Beschreibung<br />
cyclo[TrpGlyHisProGlnGlu]βAlaβAlaPhe(4Br)ArgHsl 64<br />
cyclo[Trp(O)GlyHisProGlnGlu]βAlaβAlaPhe(4Br)ArgHsl<br />
GlyHisProGlnGlu(Trp)βAlaβAlaPhe(4Br)ArgHsl 65<br />
cyclo[TrpGlyHisProGlnGlu]βAlaβAlaPhe(4Br)ArgHsl 64<br />
cyclo[Trp(O)GlyHisProGlnGlu]βAlaβAlaPhe(4Br)ArgHsl<br />
GlyHisProGlnGlu(Trp)βAlaβAlaPhe(4Br)ArgHsl 65<br />
60min 47°C 1414,6 m/z [67%] cyclo[Trp(O)GlyHisProGlnGlu]βAlaβAlaPhe(4Br)ArgHsl<br />
In einem weiteren Experiment wurde die Sollbruchstelle/Linker-Strategie umgekehrt<br />
angewandt. Hierzu wurde also ein Peptid 66 synthetisiert, bei dem die Positionen von<br />
Tryptophan -jetzt als Linker- und Methionin -jetzt am N-Terminus- vertauscht wurden.<br />
Leider glückte die BNPS-Skatol-vermittelte Abspaltung des Peptids vom Harz weder<br />
nach einer Reaktionszeit von 6 min, beziehungsweise 60 min, noch nach<br />
Reaktionszeit über Nacht.<br />
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