Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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5 Anwendung der Methode<br />
stoffe bilden einen schwerlöslichen, violett-blauen bis schwarzen Überzug auf den<br />
Harzkugeln.<br />
Alkalische<br />
Phosphatase<br />
Abb. 5.4: Die durch Alkalische Phosphatase katalysierte Farbreaktion mit BCIP/NBT.<br />
5.3.1 Etablierung des Screenings<br />
Für die Optimierung des Testsystems wurden zunächst am Peptidsynthesizer zwei<br />
Kontrollpeptide synthetisiert. Zur eindeutigen Identifizierung der erfolgreichen<br />
Synthese wurde von einer kleinen Menge Harz eine Testabspaltung vorgenommen.<br />
Die abgespaltenen Peptide wurden anschließend mittels RP-HPLC und ESI-MS<br />
charakterisiert. Als Positivkontrolle wurde GHPQG-βAARM-TentaGel, als Negativ-<br />
kontrolle APARG-βAARM-TentaGel dargestellt. Für eine zusätzliche Positivkontrolle<br />
wurde aminofunktionalisiertes TentaGel durch basische Umsetzung mit Biotin-NHS<br />
biotinyliert. Außerdem wurde aminofunktionalisiertes TentaGel als zweite Negativ-<br />
kontrolle herangezogen. Jede dieser vier Kontrollen wurde parallel unter gleichen<br />
Screeningbedingungen behandelt (<br />
Tabelle 6).<br />
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