Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
8.3.8 Synthese des Peptids 71 zur Untersuchung einer
enzymatischen Ringöffnung
Wie in AAV 1 beschrieben, wurde TentaGel mit Fmoc-Met-OH beladen
(Beladungsdichte: 0,12 mmol/g). Anschließend erfolgte nach AAV 7 die Synthese
des linearen Vorläuferpeptids unter Verwendung des 20µM 3ml.kem chemistry files.
Im ersten Zyklus wurde das Harz gewaschen (Modulfolge: eGD). Die Modulfolge der
darauffolgenden Zyklen lautete BbDAFiiihd (Single Couple, Cond Cap./5eq.). Mit
einem abschließenden final DCM wash (Modul: c) wurde die automatisierte SPPS
beendet. Folgende Aminosäurebausteine wurden verwendet: Fmoc-βAla-OH,
Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Glu-OAll, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH,
Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Ser( t Bu)-OH und Fmoc-Tyr( t Bu)-OH. Nach der
automatisierten SPPS erfolgte die Abspaltung der Fmoc-Schutzgruppe (AAV 10), die
Abspaltung der Allyl-Schutzgruppe (AAV 11a) und schließlich die Cyclisierung mit
PyBOP nach AAV 8.
Zur Analytik wurden kleine Mengen des Peptids entnommen und mit BrCN nach AAV
14 gespalten.
Fmoc-Lys-Ala-Tyr-Phe-Ser-Ala-Gly-Glu(βAla-Pro-Pro-βAla-Hsl)-OAll (67→68)
Analytische RP-HPLC (Eurosphere Säule): (10-100% B° in 20 min, 1ml/min) tR = 15,47 min
MALDI-MS: 1554,3 m/z [M+H] +
Berechnet: C78H101N14O20 + (1553,7311 m/z)
H-Lys-Ala-Tyr-Phe-Ser-Ala-Gly-Glu(βAla-Pro-Pro-βAla-Hsl)-OH (69→70)
Analytische RP-HPLC (Eurosphere Säule): (10-100% B° in 20 min, 1 ml/min) tR = 10,6 min
MALDI-MS: 1291,7 m/z [M+H] +
Berechnet: C60H87N14O18 + (1291,6317 m/z)
cyclo-[Lys-Ala-Tyr-Phe-Ser-Ala-Gly-Glu(βAla-Pro-Pro-βAla-Hsl)] (71→72)
Analytische RP-HPLC (Eurosphere Säule): (10-100% B° in 20 min, 1 ml/min) tR = 12,1 min
MALDI-MS: 1274,5 m/z [M+H] +
Berechnet: C60H85N14O17 + (1273,6212 m/z)
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