Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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5 Anwendung der Methode<br />
Wertänderung von 7,4 auf 9,0 durch den Wechsel auf TBS-Puffer. Schließlich<br />
wurden in einer 30 minütigen enzymkatalysierten Farbreaktion die aktiven<br />
Harzkugeln angefärbt. Zum Abstoppen der Reaktion wurde der pH-Wert durch<br />
Waschen mit HCl (0,1 N) abgesenkt. Abschließend wurde das Harz mit Wasser<br />
gewaschen. Zum Aussortieren der Hitbeads wurden alle Harzkugeln in eine<br />
Petrischale überführt. Unter dem Mikroskop wurden mit Hilfe einer Glaskapillare alle<br />
angefärbten Kugeln aufgenommen und gemeinsam in einer Einwegspritze mit PE-<br />
Fritte für den anschließenden partiellen Edman-Abbau gesammelt.<br />
Abb. 5.7: Bild der OBOC-Cyclopeptidbibliothek nach dem Screening mit SA-AP-<br />
Konjugat. Im Ausschnitt sind deutlich sieben Hitbeads erkennbar.<br />
Vor der Sequenzierung wurden die aussortierten Hitbeads mit Guanidiniumlösung<br />
(6 M, pH 1,0) behandelt. Dies dient zur Denaturierung und zum Abstreifen des SA-<br />
AP-Konjugats. Der Farblack wurde durch Waschen mit TFA entfernt. Der<br />
anschließende partielle Edman-Abbau erfolgte wie in Abschnitt 4.2.3. beschrieben.<br />
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