Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
8.3.9 Synthese der Peptide (92-97) zur Bestimmung der KD-Werte
Die Festphasensynthese der Peptide erfolgte an RinkAmid-Research-Harz (R-RAM-
TG, Rapp Polymer) am Peptidsynthesizer nach AAV 7. UV FastMoc0.10,S200.kem
wurde als chemistry file ausgewählt. Für den ersten Zyklus wurde die Modulfolge
ecDBgADEFd (Zyklus1: Amid) verwendet. Zyklus zwei bis elf verlief mit der
Modulfolge BbADEFfhd (SingCoup,CondCap.) und als abschließender Zyklus folgten
die Module ecD (Complete wash). Folgende Aminosäurebausteine wurden
verwendet: Fmoc-βAla-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Glu(OAll)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH und Fmoc-Lys(Alloc)-OH bzw.
Boc-Lys(Alloc)-OH.
Die Abspaltung der Alloc- und Allyl-Schutzgruppe erfolgte nach AAV 11 Variante B.
Nach ausführlichem Waschen des Harzes, einer Testabspaltung und MALDI-TOF-
MS Analyse wurde das Harz in zwei gleich große Aliquote aufgeteilt. Eine Hälfte
wurde als lineares Peptid direkt nach AAV 19 vom Harz gespalten.
Die zweite Hälfte wurde wie AAV 8 beschrieben cyclisiert, und anschließend nach
AAV 19 vom Harz gespalten.
Hitsequenz: 93/92
H-Lys-His-Pro-Gln-His-Gly-Glu-βAla-Pro-Pro-Arg-NH2 (93)
Roh MALDI-TOF-MS: 1252,1 m/z
Präparative RP-HPLC (Eurosphere Säule): (11-15% B° in 20 min, 9,8 ml/min) tR = 7,0 min
Ausbeute nach HPLC: 17% (10,7 mg)
Analytische RP-HPLC (Eurosphere Säule): (8-30% B° in 45 min, 0,9 ml/min) tR = 12,4 min
ESI-QTOF: 1252,6653 m/z (±0,4 ppm)
Berechnet: C54H86N21O14 + (1252,6658 m/z)
H-cyclo[Lys-His-Pro-Gln-His-Gly-Glu]-βAla-Pro-Pro-Arg-NH2 (92)
Roh MALDI-TOF-MS: 1234,3 m/z
Präparative RP-HPLC (Eurosphere Säule): (12-18,5% B° in 20 min, 9,8 ml/min) tR = 6,6 min
Ausbeute nach HPLC: 22% (13,5 mg)
Analytische RP-HPLC (Eurosphere Säule): (8-30% B° in 45 min, 0,9 ml/min) tR = 13,1 min
ESI-QTOF: 1234,6576 m/z (±1,9 ppm)
Berechnet: C54H84N21O13 + (1234,6552 m/z)
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