Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

6 Synthese fluoreszenzmarkierter Phosphopeptide
Abb. 6.4 UV-Monitoring der Fmoc-Abspaltung während der automatisierten SPPS von
110.
Der Syntheseweg des Peptids SRBS-Y241 ist in Abb. 6.3 aufgezeigt. Der Aufbau der
Peptidkette erfolgte nach Standard-Fmoc-SPPS-Bedingungen am Peptidsynthesizer
im 20 µmol Ansatz. Der Verlauf der Synthese wurde mittels UV-Monitoring verfolgt
(Abb. 6.4). Eine Testabspaltung direkt nach der automatisierten Synthese mit
anschließender RP-HPLC-offline-ESI-MS-Analyse bestätigte den Erfolg der
Synthese. Es folgte eine manuelle Behandlung des Harzes mit 20% Piperidin in DMF
zur Entfernung der N-terminalen Fmoc-Schutzgruppe. Deren Vollständigkeit wurde
ebenfalls durch UV-Messung überprüft. Nach ausführlichem Waschen und Trocknen
des Peptidylharzes erfolgte die Anknüpfung der Fluoreszenzmarkierung. Hierzu
wurde das Harz über Nacht mit einer Lösung aus 4 eq. Sulforhodamin-B-
sulfonylchlorid (SRBS-Chlorid) und 6eq. DIPEA in DMF behandelt. Daraufhin wurde
das fluoreszenzmarkierte Peptid mit Reagenz K vom Harz gespalten. Unter diesen
Bedingungen werden simultan alle säurelabilen Seitenkettenschutzgruppen entfernt.
Das Peptid SRBS-Y241 wurde ausgefällt, mittels präparativer RP-HLPC aufgereinigt
und konnte mit einer Ausbeute von 34% (bezogen auf 20 µmol) erhalten werden.
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