Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

3 Sollbruchstellen
Die Literaturausbeuten der Spaltung zeigten eine große Variabilität (40-80%).
Sowohl Zeitler et al. [66] als auch Fontana et al. [67] weisen darauf hin, dass der Erfolg
der Spaltung stark vom Reinheitsgrad des Reagenzes abhängt. Es gilt daher stets zu
beachten, dass es sich um ein lichtempfindliches Reagenz handelt, welches sich bei
Raumtemperatur leicht zersetzt.
Häufig beobachtete Nebenreaktionen sind die Oxidation von Methionin (Sulfid zu
Sulfoxid), Disulfidbildung bei Cystein und eine elektrophile Bromierung von
Tyrosin. [68] Durch kurze Reaktionszeiten und Verminderung der Konzentration wurde
versucht, diese möglichst zu eliminieren. [69]
Um die prinzipielle Einsatzmöglichkeit von Tryptophan als Sollbruchstelle in einem
cyclischen Peptid zu untersuchen, wurde das festphasengebundene Peptid 63
herangezogen, welches einen homodeten Zyklus aufweist. (Abb. 3.24) Die Synthese
der linearen Vorläufersequenz 61 erfolgte am Peptidsynthesizer unter Standard-
Fmoc-SPPS-Bedingungen. Der Verlauf der Reaktion wurde mittels UV-Monitoring
überprüft. Als polymerer Träger diente TentaGel, da dieser in einer späteren
Anwendung der Methode aufgrund seiner guten Quelleigenschaften im wässrigen
Milieu der Träger der Wahl ist. Der Linker, der das Peptid mit dem Harz verbindet,
muss so gewählt werden, dass er den basischen Bedingungen während der SPPS
standhält. Außerdem ist eine Stabilität unter den Abspaltbedingungen der
säurelabilen Schutzgruppen und der Allyl-Schutzgruppe, sowie zur BNPS-Skatol-
Spaltung notwendig. Die Wahl des Linkers fiel hierbei auf Methionin. Als Aminosäure
gewährt es die erforderliche Stabilität. Lediglich bei der oxidativen Halogenierung
mittels BNPS-Skatol könnte es zur Sulfoxid-Bildung kommen; dies ist jedoch mit
einer Reduktion, wie in Abschnitt 4.2.3.3 beschrieben, leicht umkehrbar. Zur
Erleichterung der massenspektrometrischen Charakterisierung und Sequenzierung
wurde auch hier eine Massenspacersequenz –ßAla-ßAla-Arg-Phe(4Br)- am
C-Terminus des Peptids aufgebaut. Diese Spacersequenz sorgt für eine molekulare
Masse größer als 500 Da für alle zur Sequenzierung notwendigen Fragmente. Durch
die Anwesenheit von Arginin ist eine positive Ladung im Peptid gewährleistet. Und
schließlich erleichtert para-Bromphenylalanin, durch das charakteristische
Isotopenverteilungsmuster von Brom, die Auswertung der Massenspektren.
41