Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

6 Synthese fluoreszenzmarkierter Phosphopeptide
Phosphoramidit 103 bildet sich unter leicht sauren Bedingungen (Tetrazol) zunächst
ein Phosphittriester-Intermediat 104. Das Phosphoratom liegt hierbei als P III vor und
muss im nächsten Schritt zum Phosphorsäuretriester 105 mit P V oxidiert werden.
Gebräuchliche Oxidierungsmittel hierfür sind meta-Chlorperbenzoesäure (mCPBA),
tert-Butylhydroxyperoxid und wässrige Jodlösung. Während der Oxidation kann es
leicht zu Nebenreaktionen, wie der Oxidation in den Seitenketten von Cystein,
Methionin und Tryptophan, kommen. Phosphoramidite sind reaktiver als
Phosphorchloridate und werden bei Weitem häufiger verwendet. [127]
Abb. 6.2 Fmoc-Tyr[PO(OBzl)OH]OH 107, der gebräuchlichste Baustein für
Phosphotyrosin beinhaltende Peptide in der Standard-Fmoc-SPPS.
Bedient man sich bereits phosphorylierter Aminosäurederivate, welche mit Schutz-
gruppen versehen sind als Bausteine in der Peptidsynthese, so umgeht man die
Problematik der Oxidation und der Phosphorylierung aller freien Hydroxygruppen.
Die Phosphat-Gruppe wird durch den Gebrauch von Schutzgruppen maskiert, um die
Bildung von Pyrophosphat und Dephosphorylierungen zu verhindern. [128] Bei der
Darstellung von Phosphotyrosin beinhaltenden Peptiden ist der Einsatz von Fmoc-
Tyr[PO(OBzl)OH)]-OH am gebräuchlichsten (Abb. 6.2). Die Benzylgruppe lässt sich
leicht einführen und kann durch Behandlung mit TFA, parallel mit den anderen
säurelabilen Schutzgruppen, schnell entfernt werden. Gewöhnlich finden nur
Monobenzylester Verwendung in der Fmoc/t-Bu SPPS. Dibenzylester bringen keinen
Vorteil, da sie bei der Behandlung mit Piperidin (Fmoc-Entschützen) zu
Monobenzylester umgewandelt werden. [129] Das Einbringen einer
Phosphoaminosäure ist eine schwerwiegende Veränderung in der Sequenz des
Peptids. Peptidsequenzen, die ohne Phosphorylierung leicht zu synthetisieren waren,
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