Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
8.6 SPR-Experimente zur Bestimmung der KD-Werte
8.6.1 Zusammensetzung der Puffer und Lösungen für die SPR-
Experimente
Acetat-Puffer (pH 4,5)
Zunächst wurden zwei 0,2 M Stammlösungen hergestellt. Für die saure Stamm-
lösung wurden 1,14 ml Eisessig in 100 ml Wasser gemischt. Für die basische
Stammlösung wurden 1,64 mg Natriumacetat in 100 ml Wasser gelöst. Zur
Herstellung des Puffers wurden 50 ml der basischen Stammlösung vorgelegt und
durch Zugabe der sauren Stammlösung auf pH 4,6 eingestellt. Anschließend wurden
50 ml dieser Pufferlösung entnommen und mit Wasser auf 1000 ml aufgefüllt.
HBS-N Puffer (pH 7,2)
Zur Herstellung von 2 l HBS-N Puffer wurden 4,766 g (10 mM) Hepes und 17,532 g
NaCl (150 mM) in ca. 1,6 l Wasser gelöst, durch Zugabe von 1 N NaOH (ca. 10 ml)
auf pH 7,2 eingestellt und anschließend auf 2 l mit Wasser aufgefüllt.
Aktivierungslösung
Unmittelbar vor Gebrauch wurden folgende drei Lösungen als Aktivierungs-„Kit“
hergestellt.
1) 76,6 mg EDC wurden in 1 ml Wasser gelöst (0,4 M)
2) 11,5 mg NHS wurden in 1 ml Wasser gelöst (0,1 M)
3) 60 µl Ethanolamin wurden mit 940 µl Wasser gemischt und durch vorsichtige
Zugabe von konz. HCl auf pH 8,5 eingestellt.
Streptavidin (50 µg/ml)
0,1 mg Streptavidin wurden in 2 ml NaOAc-Puffer gelöst.
Verdünnungsreihe der Peptide
Die zu untersuchenden Peptide (92-97) wurden in Eppendorf-Caps eingewogen und
in HBS-N Puffer gelöst. Anschließend wurden in Mikrotitterplatten 1:1
Verdünnungsreihen hergestellt.
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