Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
sowie eine 0,02 M Lösung aus Pd(PPh3)4 in trockenem DCM (1 eq. pro Allyl- bzw.
Alloc-Gruppe). Nach 30 min wird die Lösung erneuert und weitere 30 min geschüttelt.
Anschließend wird das Harz fünfmal mit DCM, fünfmal mit DMF, zweimal mit
Dioxan/Wasser (9:1), einmal mit Methanol, fünfmal mit DMF und fünfmal mit DCM
gewaschen.
AAV 12 Spaltung der säurelabilen Schutzgruppen an fester Phase
Zum Entfernen der säurelabilen Schutzgruppen (Boc, Pbf, Trt, t Bu) wird das
Peptidylharz in eine Einwegspritze mit PE-Fritte eingewogen. Das Harz wird 3 h bei
RT mit einer Lösung aus TFA/TIS/Wasser (95:2.5:2.5) behandelt. Anschließend wird
zweimal je 5 Minuten mit TFA, fünfmal je 2 Minuten mit DMF und fünfmal je 1 Minute
mit DCM gewaschen. Danach wird das Harz am Vakuum getrocknet.
AAV 13 Met(O)-Reduktion
Während der Synthese, dem Screening, der Aufbewahrung und dem partiellen
Edman-Abbau besteht die Möglichkeit, dass der Thioether im Methionin unter Einfluß
von Luftsauerstoff und TFA zum Sulfoxid oxidiert wird. Um diese Oxidation
umzukehren (reduzieren), wird eine Lösung aus 9,6 mg Ammoniumiodid in 0,5 ml
TFA (0,132 M, gesättigt violette Lösung) und 20 µl Dimethylsulfid (0,545 M, dann ist
die Lösung gelb) hergestellt. Mit dieser Lösung werden die Harzkugeln in einer
Einwegspritze mit PE-Fritte für 20 min bei 0°C behandelt. Anschließend wird
ausgiebig mit Wasser gewaschen (25x1 min). Nun kann nach AAV 14 die Bromcyan-
Spaltung erfolgen.
AAV 14 Bromcyan-Spaltung
Hierzu werden unmittelbar vor Gebrauch 40 mg BrCN in 1 ml 70% TFA in Wasser
gelöst.
Peptidabspaltung von einzelnen Kugeln für anschließende MALDI-TOF-
Analyse
Die Kugeln werden in Eppendorf-Caps (500 µl / transparent) überführt, wobei in
jedem Cap immer nur eine Kugel sein darf (unter der Stereolupe überprüfen). Nach
einem kurzen spindown in der Zentrifuge fügt man je 10 µl Bromcyan-Lösung hinzu
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