Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
8.2 Allgemeine Arbeitsvorschriften für die SPPS
AAV 1 Darstellung von Fmoc-Met-TG
In eine Einwegspritze mit eingesetzter PE-Fritte wiegt man das Harz (TG-S-NH2) ein
und lässt es für 10 min in NMP (5 ml für 1 g) quellen. Fmoc-Met-OH (3 eq.), Boc-Met-
OH (3 eq.), HBTU (5.9 eq.), HOBt (6 eq.) und DIPEA (12 eq.) werden in NMP (5 ml
für 1 g Harz) gelöst und aufgezogen. Man schüttelt 18 h, saugt ab und wäscht zehn-
mal mit DMF, sowie zweimal mit DCM. Die Vollständigkeit der Reaktion wird mit
Kaisertest (AAV 4a) und TNBS-Test (AAV 4b) überprüft. Nach dem Capping (AAV 5)
wird das Harz im Vakuum getrocknet und die Beladungsdichte nach AAV 6 bestimmt.
AAV 2 Beladung von Hydroxyharz mit MSNT-Methode
In eine Einwegspritze mit eingesetzter PE-Fritte wiegt man das Harz (TG-S-NH2) ein
und lässt es für 10 min in DCM quellen (5 ml für 1 g). In ein Becherglas wiegt man
die mit Fmoc-geschützte Aminosäure (5 eq.), löst diese in DCM (1 ml/ 0.1 mmol) und
gibt Methylimidazol (3,75 eq.) zu. Falls sich die Aminosäure nicht vollständig löst, gibt
man vorsichtig einige Tropfen THF dazu. Die klare Lösung wird nun zu MSNT (5 eq.)
gegeben und einige Minuten gerührt. Wenn alles gelöst ist, zieht man die
Kupplungslösung zum Harz auf und schüttelt 1-18 h. Anschließend wäscht man
zehnmal mit DCM, fünfmal mit DMF und trocknet das Harz am Vakuum. Die
Beladungsdichte wird nach AAV 6 bestimmt und gegebenenfalls wird die Kupplung
wiederholt. Schließlich behandelt man das Harz eine Stunde mit einer
Cappinglösung aus 0,4 ml Benzoylchlorid, 55 µl Pyridin und 4 ml DMF, wäscht mit
DMF (5x) und DCM (10x) und trocknet erneut. Abschließend wird die
Beladungsdichte nach AAV 6 erneut bestimmt.
AAV 3 Anknüpfung einer Aminosäure
Die Peptidkupplung erfolgt mit HOBt/HBTU in NMP. Hierzu werden 4 eq. (bezogen
auf die Harzbelegung) der jeweiligen Aminosäure zusammen mit 6 eq. HOBt und
4 eq. HBTU in möglichst wenig NMP gelöst und 8 eq. DIPEA zugegeben. Nach einer
kurzen Durchmischung wird die Lösung zu dem gequollenen Harz gegeben und die
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