Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

5 Anwendung der Methode
Abb. 5.14 Sensorgramm der Bindung des cyclischen Peptids 92 und die Steady-State-
Affinity-Auswertung zur Ermittlung der Bindungskonstanten. Die Auswertung
ergab KD=323 ± 24 µM.
Abb. 5.14 zeigt ein Sensorgramm, das aus der Messung der Interaktion des
cyclischen Peptids 92 erhalten wurde. Aus dem Sensorgramm wird ersichtlich, dass
die Assoziation und Dissoziation des Protein-Peptid-Komplexes sehr schnell
vonstatten gehen. Eine Ermittlung der Bindungskonstanten über kinetische Werte ist
somit nicht möglich. Die Auswertung erfolgte deshalb ausschließlich über die
Anwendung der Steady-State-Affinity-Methode, welche Messwerte nach Einstellung
des Gleichgewichts für die Berechnung von KD-Werten heranzieht. Eine Darstellung
zur Ermittlung der Bindungskonstante ist ebenfalls in Abb. 5.14 zu sehen. Für das
aus dem Screening positiv hervorgegangene cyclische Peptid 92 wurde eine
Bindungskonstante von 323 ± 24 µM bestimmt. Für alle anderen Peptide ergaben
sich Bindungskonstanten, die außerhalb des gemessenen Konzentrationsbereiches
lagen. Um auch von ihnen brauchbare Werte zu erhalten, wurde die Messung mit
einer Peptidkonzentration von 0,01-10 mM wiederholt. Die ermittelten Bindungs-
konstanten können Tabelle 8 entnommen werden.
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