propiedades estructurales y funcionales de preparados proteicos de ...

Capítulo2: Hidrólisis enzimática de aislados proteicos de amaranto
Las muestras utilizadas de aislados e hidrolizados fueron suspendidas en los
buffers de pH 2,0 y 8,0 en una concentración de 2 mg/ml agitadas durante 1 h a
temperatura ambiente y luego centrifugadas por 30 min a 10000 g a 20 °C. El
sobrenadante fue lo que se utilizó en las experiencias. Cien μl de las soluciones
de proteína se sembraron con una microjeringa en distintas concentraciones
(para obtener distintas cantidades de proteína total sembrada) cubriendo toda la
superficie del buffer contenido en la cuba de la balanza. El área inicial, con las
barreras abiertas, fue de 350 cm 2 . Se dejó el sistema por 1 h para que las proteínas
se puedan adsorber y reordenar en la superficie. Transcurrido ese lapso se
procedió a disminuir el área de la balanza. Esto se hizo a una velocidad de cierre
de las barreras que producía una disminución del área de 40 cm 2 /min hasta llegar
a un valor final de 40 cm 2 de área final. Las variaciones detectadas por la placa
fueron registradas a lo largo de todo el proceso por un adquisidor de datos
asociado a una PC. Las cantidades de proteína sembrada fueron 25, 35, 50 y 100
μg para todas las muestras ensayadas. Todas las medidas se realizaron a 20 °C ±
0,2 °C.
2.1.9. Tensiometría de gota dinámica y reología
interfacial
2.1.9.1. Tensiometría de gota:
La tensiometría de gota permite medir la tensión interfacial. Cuando una gota de
un fluido está en contacto con otro fluido, la forma de la gota va a estar
determinada por dos efectos: el de la tensión interfacial entre los dos fluidos que
forzará a la gota a tomar la forma esférica y el efecto de la atracción gravitatoria
que tenderá a producir una elongación o aplastamiento de la gota. Para una gota
asimétrica la ecuación de Laplace toma la forma:
(4) (1/x) × d(x sen θ)/dx = (2/b) – c × z
donde x y z son las coordenadas cartesianas para todos los puntos del perfil de la
gota. El origen de coordenadas está considerado en el ápice de la gota, b es el
radio de curvatura en el ápice, θ es el ángulo de la tangente en el perfil, c la
constante de capilaridad definida como c = g Δρ/γ, con g igual a la aceleración de
la gravedad, Δρ la diferencia de densidad de los dos fluidos y γ la tensión
interfacial.
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