propiedades estructurales y funcionales de preparados proteicos de ...

Capítulo 1: Tratamiento ácido de aislados de soja y amaranto
Luego del tratamiento ácido en condiciones reductoras desaparecen total o
parcialmente las especies M (56 kDa), L (45 kDa), la banda correspondiente a A1
(36 kDa), A2 (34 kDa), y las correspondientes a B1 (25 kDa) y B2 (23 kDa),
polipéptidos pertenecientes a las globulinas P, 11S y 7S. Paralelamente se detecta
la aparición de bandas correspondientes a polipéptidos con pesos moleculares de
31, 29, 27 y 16 kDa aproximadamente. En las corridas SDS-PAGE realizadas en
ausencia de 2-ME, en la calle correspondiente a AT, desaparecen las bandas de 56
kDa (polipéptido M) y las de pesos moleculares de alrededor de 30 kDa (A1 y
A2), pero se detecta la aparición de una banda de 55 kDa, otra de 47 y otra de 36
kDa. El cambio más importante se observa en la parte inferior del gel, por debajo
de 14 kDa, en donde aumenta la intensidad de concentración proteica y se
pueden observar la aparición de nuevas bandas a bajos pesos moleculares
(alrededor de 8 kDa).
La SDS-PAGE en condiciones reductoras correspondiente a MN (mezcla de SN y
AN 1:1) presenta un perfil intermedio entre SN y AN. Pero en la calle
correspondiente a MT se produjo la desaparición de especies de mayor peso
molecular y aparición de especies de menor tamaño, al igual que en el caso de
AT. También hay ciertos polipéptidos que aporta la soja que disminuyeron su
intensidad en forma parcial luego del tratamiento ácido, como el polipéptido A
de la proteína 11S de un peso molecular de alrededor de 30 kDa. Esta
desaparición parcial no se produjo cuando se analizó ST. En los geles en
condiciones no reductoras, sobre la calle correspondiente a MT también se puede
observar que con el tratamiento ácido se produjo la desaparición de la banda
correspondiente AB de la fracción 11S perteneciente a la soja que tiene un peso
molecular aproximado de 54 kDa. Estos resultados sugieren la existencia de un
factor hidrolizante que está presente en el aislado de amaranto y que se activa en
algún momento del tratamiento ácido realizado. Este factor hidrolizante también
actúa sobre algunos polipéptidos de las proteínas de soja cuando se tratan los
aislados proteicos de ambas especies juntos. Al suceder esta hidrólisis sobre los
polipéptidos de soja se puede descartar que el pH ácido del medio utilizado
durante el tratamiento fuese la razón de la hidrólisis de las proteínas de
amaranto. Los resultados hicieron que se profundice en este fenómeno para
poder dilucidar la naturaleza del factor hidrolítico (sección 1.2.1.2.3.).
Se realizaron SDS-PAGE en condiciones reductoras de todas las muestras para
diferenciar la solubilidad relativa en buffer A de los distintos polipéptidos que
integran la mezcla proteica. Se suspendieron los aislados en el buffer en una
concentración de 3 mg/ml y se agitaron durante 1 h a temperatura ambiente para
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