propiedades estructurales y funcionales de preparados proteicos de ...

Capítulo 1: Tratamiento ácido de aislados de soja y amaranto
de espesor (SDS-PAGE o SDS-PAGE + 2-ME según correspondiera). En este
mismo gel, en una calle aparte y como referencia, se sembró la mezcla de
proteínas patrón de masa molecular.
1.1.6.7. Coloración
Los geles fueron fijados y teñidos al mismo tiempo con Coomasie Brilliant Blue
R-250 (Anedra, Argentina) al 0,192% p/v en agua/metanol/ácido acético (10:10:4)
durante 12 h y desteñidos con una mezcla agua/etanol/ácido acético (65:25:10) a
temperatura ambiente. Cuando la cantidad de proteína no fue la suficiente para
ser detectada con Coomassie Brilliant Blue R-250, se realizó una tinción con plata
(Blum, Beier y col. 1987).
1.1.6.8. Obtención de las imágenes y análisis de los geles
Las imágenes de los geles de electroforesis fueron digitalizadas con un equipo
BIO–RAD (Gel Doc 1000).
1.1.7. Determinación de la hidrofobicidad superficial
La hidrofobicidad es la tendencia de los solutos no polares de adherirse entre sí
en entornos acuosos (Murphy, Privalov y col. 1990). Las interacciones
hidrofóbicas en las proteínas tienen un rol muy importante en definir la
formación y mediación de interacciones proteína-proteína (Kauzmann 1959). El
número y el tamaño relativo de los sitios hidrofóbicos en la superficie de una
proteína suelen ser determinantes de la solubilidad y tendencia a agregarse de
las moléculas proteicas.
1.1.7.1. Determinación por la sonda ANS
La hidrofobicidad superficial (H0) de las muestras se determinó siguiendo el
método propuesto por Cardamone y Puri (1992). Se utilizó la sonda fluorescente
8-anilino-1-naftalensulfonato de amonio (ANS) (Aldrich Chemical Co., EE.UU).
La fluorescencia de esta sustancia aumenta al encontrarse adherida a un sitio
hidrofóbico, cualidad que se utiliza para la cuantificación de los sitios
hidrofóbicos expuestos, superficiales, de las proteínas midiendo las
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