propiedades estructurales y funcionales de preparados proteicos de ...

Fase lipídica: gotas concentradas y
lavadas.
Fase inferior: fase continua de la
muestra y proteína no adsorbida a la
interfase.
Capítulo2: Hidrólisis enzimática de aislados proteicos de amaranto
Dentro de la jeringa: solución de sacarosa
concentrada y emulsión.
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Deposición cuidadosa de la mezcla
de muestra con solución de
sacarosa en menor concentración
en el fondo de un tubo
Centrifugación: 3000 g por 2 h
a 10 ºC. Cremado y lavado de
las gotas simultáneo.
Congelación de tubos
en posición vertical.
Figura 2.5.: esquema de separación y lavado de gotas de emulsión de la fase continúa.
Posteriormente los tubos congelados se cortaron con la ayuda de una sierra
eléctrica en una posición del tubo que permitió separar la fase inferior de la
superior. La fase superior se descongeló y se recuperó con la ayuda de una
espátula y se colocó en otro tubo plástico de 15 ml que contenía 3 ml de solución
de SDS 1%. El SDS tiene la función de desplazar las proteínas de la interfase a la
fase acuosa por ser mejor agente tensioactivo. A los tubos con la fase crema y el
SDS se los dejó en reposo 1 h a temperatura ambiente y luego se centrifugaron a
3000g durante 1 h a 10 °C. Se recuperó la fase inferior de los tubos que contiene
las proteínas desorbidas de la interfase por el SDS. Luego se analizaron las
proteínas de la interfase por electroforesis SDS-PAGE (sección 1.1.6.).