propiedades estructurales y funcionales de preparados proteicos de ...

Capítulo 1: Tratamiento ácido de aislados de soja y amaranto
(4) KAV = (Ve – V0) / (VT – V0)
Ve corresponde al volumen de elución, en ml, del pico de interés; VT es el
volumen total del lecho de la columna que en este caso por las dimensiones de la
misma fue de 25 ml y V0 es el volumen muerto.
Los valores de absorbancia a 280 nm fueron determinados a lo largo de la corrida
en la salida de la columna mediante un monitor UV-1 (Pharmacia LKB)
utilizando una sensibilidad entre 0,02 y 0,1. El procesamiento de los perfiles
obtenidos se realizó con el programa FPLC Director (Pharmacia LKB).
1.1.9. Calorimetría diferencial de barrido (DSC)
1.1.9.1. Principio
La calorimetría diferencial de barrido o DSC (differential scanning calorimetry),
se basa en el registro de la diferencia de energía que se debe entregar o quitar a
una muestra para calentarla o enfriarla en forma simultánea, a la misma
velocidad, que a una referencia inerte en función del tiempo. Si no hubiese
eventos térmicos en la muestra las temperaturas de la referencia y la de la
muestra aumentarían linealmente en función del tiempo, pero si apareciese un
evento térmico en la muestra, como por ejemplo una desnaturalización en el caso
de las proteínas, el equipo debería entregar más calor para mantener su
temperatura igual a la de la referencia. Estas diferencias se registran como picos
positivos o negativos ya sean fenómenos endotérmicos o exotérmicos y el área de
los picos se cuantifica como entalpías de transición.
1.1.9.2. Operación
Las medidas de DSC se realizaron en un calorímetro TA Q100 (TA Instruments,
EE.UU). El equipo fue calibrado previamente a una velocidad de 10 °C/min con
indio, ácido láurico y ácido esteárico pro análisis, como patrones. Antes de las
medidas las muestras tratadas por ácido fueron dializadas contra agua destilada
usando membranas de diálisis (Sigma-Aldrich, EE.UU) y liofilizadas. Todas las
muestras en polvo de aislados nativos y tratados fueron suspendidas en buffer A
en una concentración de 20 % p/v. Se prepararon cápsulas de aluminio
herméticamente selladas con conteniendo entre 15 y 22 mg de la suspensión de
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