propiedades estructurales y funcionales de preparados proteicos de ...

Capítulo 1: Tratamiento ácido de aislados de soja y amaranto
electroforesis desnaturalizante (SDS-PAGE) o no desnaturalizante (N-
PAGE) respectivamente.
2. Buffer de gel apilador: Tris-HCl 0,125 M (pH 6,8) con y sin SDS 0,1% (p/v)
3. Buffer de gel separador: Tris-HCl 0,375 M (pH 8,8) con o sin el agregado de
SDS 0,1% p/v. N´, N´, N´, N´, TEMED 0,1% v/v.
4. Buffer de muestra SDS-PAGE: Tris-HCl 0,185 M (pH 8,8), glicerol 12,5% v/v,
SDS 2,0% p/v, y azul de bromofenol 0,05% p/v con o sin el agregado de 2-
mercaptoetanol (2ME) 5% v/v, para obtener condiciones reductoras o no
reductoras, respectivamente.
5. Buffer de muestra N-PAGE: Tris-HCl 0,185 M (pH 8,8), glicerol 12,5% v/v y
azul de bromofenol 0,05% p/v.
6. Buffer de tratamiento para electroforesis bidimensional: Tris-HCl 0,0625 M(pH
6,8), SDS 0,1% p/v, sacarosa 20% p/v, con o sin el agregado de 2ME 0,2 M
(Utsumi, Damodaran y col. 1984).
Las muestras se prepararon dispersando la proteína en el buffer de muestra en
concentraciones de 5 a 10 mg/ml. En el caso de que las proteínas se encontrasen
dispersas en un medio líquido, se mezclaron 3 partes de suspensión proteica con
1 parte de buffer de muestra. Para las electroforesis desnaturalizantes,
inmediatamente después de la disolución de la muestra en el buffer, se las
calentó a 100 °C durante 1 min para evitar la acción de proteasas resistentes al
SDS (Gallagher 2000). De todas las muestras se sembraron aproximadamente
entre 20 y 30 μg de proteína por calle contenidos en volúmenes entre 10 y 25 μl.
Todas las electroforesis se realizaron en miniplacas con un equipo BIO-RAD,
modelo Mini Protean II (BIO-RAD life science, USA) con separadores de 1 mm
de espesor. Las corridas electroforéticas se llevaron a cabo a una corriente de 20
mA durante la primera parte de la corrida (alrededor de 20 min) y luego de 30
mA hasta finalizar.
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