propiedades estructurales y funcionales de preparados proteicos de ...

Capítulo 1: Tratamiento ácido de aislados de soja y amaranto
ser combinada con técnicas de inmunoelectrotransferencia. En la técnica de
SDS-PAGE, se mezclan las proteínas con el tensioactivo aniónico SDS para
formar complejos desnaturalizados, cargados negativamente. La cantidad de
SDS unido a las proteínas es proporcional a su tamaño: el SDS se une a la
proteína en una proporción aproximada de 1,4:1. Los complejos proteína/SDS
poseen una estructura elipsoide o de bastón, donde la cadena proteica es
distendida y solubilizada por el tensioactivo. Dado que la relación final
carga/masa queda constante para las distintas proteínas (se anula su carga
intrínseca), estas van a ser separadas en el gel poroso fundamentalmente en base
a sus diferencias de peso molecular (PM): a menor tamaño, mayor movilidad de
la proteína, y viceversa. También se pueden realizar electroforesis de proteínas
en estado nativo N-PAGE, sin la presencia de SDS, separándose las proteínas por
la relación carga masa, ya que las mismas conservan la carga original.
La electroforesis puede ser realizada en sistema continuo, donde la muestra es
aplicada directamente en el gel de separación, o en un sistema discontinuo,
donde la muestra es aplicada en un gel de apilamiento o stacking gel. El gel de
concentración difiere del de separación en el tamaño de poro y en el pH, y tiene
la función de concentrar a las proteínas de forma que la resolución no dependa
del volumen inicial de la muestra. El gel de apilamiento posee poros de gran
tamaño y por lo tanto no retiene a las proteínas. El gel de separación presenta
poros más pequeños y ayuda en la separación por tamaño molecular de las
proteínas (Hjemel y Chrambach 1981). En el gel separador, la movilidad es
restringida por el tamaño del poro, el cual depende de la concentración de
monómeros del gel. Así, si se requiere resolver componentes de muy alto PM, se
utilizan geles al 5 % o al 7,5 %, mientras que los geles de poro menor, ej. 15-20 %
son útiles en la separación de péptidos y proteínas pequeñas. Los geles de poro
intermedio (10-12 %) proveen una separación adecuada para proteínas de ~10-90
kDa.
1.1.6.2. Reactivos
Se utilizó el sistema de buffers descripto por Laemmli (1970)
Los reactivos utilizados fueron los siguientes.
1. Buffer de electrodo: hidroximetil aminometano-HCl (Tris-HCl) 0,025 M,
glicina 0,192 M (pH 8,3), con o sin el agregado de SDS 0,1% p/v, para
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