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METHODEN
● Alkalische Hydrolyse und Extraktion aus der wässrigen Phase
Das getrocknete und zerkleinerte Probenmaterial wurde in einen 100 ml-Braunglaskolben
eingewogen (je nach C org -Gehalt 0,5 – 1 g pflanzliches Material bzw. 2 g – 5g Torf und 10 g –
40 g C org -armes Wattsediment), mit 60 ml methanolischer KOH-Lösung (5%ig, Methanol/
Wasser, 4:1, v/v) versetzt und anschließend 24 h bei 80°C unter Rückfluss erhitzt. Reaktion
und Abkühlungsprozess erfolgten unter Inertgasatmosphäre (N 2 ). Nach Abkühlung des
Reaktionsgemisches erfolgte eine Filtration der überstehenden Lösung über den
Membranfilter einer Vakuumfiltrationsapparatur. Der Rückstand wurde noch dreimal mit
wenig Methanol/Wasser (80:20, v/v) nachgespült. Das Filtrat wurde in einem Scheidetrichter
aufgefangen und mit 2 N Salzsäure langsam auf einen pH-Wert von 4-5 (Indikatorpapier)
angesäuert, um Reaktionen freier Säuren zu Methylestern zu vermeiden. Das
Reaktionsgemisch wurde mehrfach mit je 30 ml Dichlormethan extrahiert, bis die organische
Phase farblos war.
● Ultraschallextraktion des Hydrolyserückstandes
Die Rückstände der alkalischen Hydrolyse wurden nach dem Trocknen dreimal mit 60 ml
eines Dichlormethan/Methanol-Gemisches (99:1, v/v) im Ultraschallbad 15 min lang
extrahiert. Nach jedem Extraktionsschritt wurde der Lösemittelüberstand über eine
Vakuummembranfilteranlage abdekantiert und abfiltriert. Nach dem letzten Extraktionsschritt
wurde die gesamte Probe auf den Membranfilter gegeben und der Filterkuchen mit dem
Lösemittelgemisch gut gespült. Die vereinigten Extraktlösungen wurden zusammen mit den
Extrakten der alkalischen Hydrolyse am Rotationsverdampfer volumenreduziert, über Nacht
mit Natriumsulfat getrocknet, über Natriumsulfat filtriert, erneut volumenreduziert und
quantitativ in einen Spitzkolben überführt. Das verbleibende Lösemittel wurde mit Stickstoff
abgeblasen und der Extrakt nach Erreichen der Gewichtskonstanz ausgewogen.
4.1.4 INTERNE STANDARDISIERUNG DER GESAMTEXTRAKTE
Um eventuelle Verluste von Biomarkern während der weiteren Probenaufarbeitung
nachvollziehen und ausgleichen zu können, wurden den Proben vor der Asphaltenfällung
Standardverbindungen (Interne Standards, ISTD) in definierter Menge zugefügt. Dabei wurde
davon ausgegangen, dass sich die Aufarbeitungsverluste der organischen Verbindungen einer
Probe proportional zu den Verlusten der Standardverbindungen verhalten. Unter dieser
Annahme wurde die Quantifizierung der in den Proben detektierten Substanzen relativ zur
Standardsubstanz durchgeführt. Weiterhin wurden die Standardsubstanzen so gewählt, dass
sich in den nach den Gruppentrennungen erhaltenen Fraktionen jeweils eine
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