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METHODEN
Dazu wurde eine mit Watte verstopfte Glassäule (1,6 cm ID, 30 cm lang) unter
stetigem Klopfen mit 16 g Kieselgel 100 (63-200 µm, 2 h aktiviert bei 190°C und desaktiviert
mit 5% H 2 O) befüllt und mit 5 g NaSO 4 (p.A.) überschichtet. Die Konditionierung der Säule
erfolgte mit 50 ml n-Hexan. Der zu trennende Gesamtextrakt wurde in n-Hexan gelöst, 5 min
im Ultraschallbad suspendiert und auf die Säule gegeben. Die Fraktion der aliphatischen
Kohlenwasserstoffe wurde mit 40 ml n-Hexan, die der aromatischen Kohlenwasserstoffe mit
60 ml 10% Dichlormethan in n-Hexan und die der Heterokomponenten mit 80 ml 10%
Methanol in Dichlormethan von der Säule eluiert. Die erhaltenen Fraktionen wurden im
Vakuum volumenreduziert, in gewogene Präparategläschen überführt und bis zur
Gewichtskonstanz im Stickstoffstrom eingedampft.
● Abtrennung cyclischer und verzweigter Verbindungen in der Aliphatenfraktion
durch Harnstoffadduktion
Um die geradkettigen n-Alkane von den verzweigten und cyclischen Verbindungen
abzutrennen, wurde ein Aliquot der Aliphatenfraktion in einem 10 ml-Zentrifugengläschen in
1 ml n-Hexan gelöst. Um das Kristallisieren des Harnstoffs zu unterstützen, wurden 5 µg
Tetracosan (n-C 40 H 82 ) zugesetzt. Unter Schütteln wurden 0,5 ml Aceton und 1 ml einer
gesättigten methanolischen Harnstofflösung zugegeben. Die dabei ausgefallenen weißen
Harnstoffkristalle wurden im Stickstoffstrom (ohne Erwärmung) getrocknet. Anschließend
wurde die Nonaddukt-Fraktion durch Extraktion mit 4 x 8 ml n-Hexan gewonnen. Diese
Prozedur umfasste nach der Zugabe von n-Hexan eine kurze Dispersion im Ultraschallbad
(ca. 30 s), 10 min Zentrifugieren (3000 min -1 ) und anschließendes Abpipettieren der
überstehenden farblosen Lösung. Die Fraktion wurde am Rotationsverdampfer eingeengt und
im Stickstoffstrom getrocknet. An der erhaltenen Nonaddukt-Fraktion wurde die
Harnstoffadduktion ein zweites Mal wiederholt. Die Addukte wurden anschließend in Wasser
gelöst, vereinigt und mit 5 x 4 ml n-Hexan im Zentrifugengläschen extrahiert. Die über
Natriumsulfat getrockneten Extrakte wurden am Rotationsverdampfer volumenreduziert,
quantitativ in ein Präparategläschen überführt und im Stickstoffstrom bis zur
Gewichtskonstanz getrocknet.
4.1.7 SÄULENCHROMATOGRAPHISCHE TRENNUNG DER HETEROKOMPONENTENFRAKTION
Da die Fraktionen der Heterokomponenten in den untersuchten Pflanzenproben weniger
komplex als z.B. in den entsprechenden Torfen sind, wurde auf eine Flash-Chromatographie,
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