francine blumental de abreu - PHL © Elysio - FUNDAÇÃO ANTÔNIO ...

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Após a identificação, por CGH array, da CNV nova rara, mapeada em
3p12.3 envolvendo o gene ROBO1, foram realizados experimentos de
sequenciamento direto, para avaliar a presença de mutações, de qPCR,
para confirmar e verificar a extensão da deleção, de bioinformática, para
confirmar a perda do sítio de splice do éxon 4 e imunoistoquímica, para
verificar a expressão da proteína ROBO1 nos tecidos tumorais de mama e
colorretal em pacientes com história familial de câncer.
a. Sequenciamento gene ROBO1
O gene ROBO1 foi dividido em 26 fragmentos correspondentes aos
31 éxons e junções íntrons-éxons. A reação de sequenciamento foi realizada
nos casos SM56 e SM37 e em seis familiares, dois da paciente SM56
(SM56.2 e SM56.3) e quatro da paciente SM37 (SM37.2, SM37.3, SM37.4,
SM37.5). Tanto as pacientes SM37 e SM56 como os familiares da SM56 não
apresentaram mutações.
Foram identificadas três mutações silenciosas, sem troca de
aminoácidos, envolvendo o gene ROBO1 apenas nos familiares da paciente
SM37. Todos os parentes do caso SM37 (SM37.2, SM37.3, SM37.4,
SM37.5) apresentaram a alteração identificada no éxon 13, posição 1739,
envolvendo a troca da base guanina pela adenina. Dois destes parentes,
SM37.2 e SM37.3 apresentaram também a alteração no éxon 16, posição
2210, envolvendo a troca da base adenina por timina. Em adição, os outros
dois parentes da paciente SM37, SM37.4 e SM37.5, apresentaram a
alteração no éxon 19, posição 2792, envolvendo a troca da base citosina por