francine blumental de abreu - PHL © Elysio - FUNDAÇÃO ANTÔNIO ...

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ÍNDICE 1 INTRODUÇÃO ...................................................................................... 1 1.1 Câncer Colorretal - Síndrome de Lynch (SL) ......................................... 3 1.2 Síndrome de Câncer de Mama-Cólon Hereditário (HBCC) ................... 10 1.3 Variação no Número de Cópias Genômicas (CNVs) ............................. 13 2 OBJETIVO ............................................................................................ 18 2.1 Objetivo Principal ................................................................................... 18 2.2 Objetivos Secundários ........................................................................... 18 3 MATERIAL E MÉTODOS ...................................................................... 19 3.1 Caracterização das amostras ................................................................ 19 3.2 Metodologia ........................................................................................... 30 3.2.1 Obtenção de DNA genômico ................................................................. 30 3.2.2 Sequenciamento dos genes MLH1, MSH2 e ROBO1 ........................... 31 3.2.3 Hibridação genômica comparativa baseada em arrays (aCGH ou CGH array) ............................................................................................ 36 3.2.4 PCR quantitativa em Tempo Real (qPCR) ............................................ 41 3.2.5 Imunoistoquímica (IHQ) ......................................................................... 47 3.2.6 Análise citogenética clássica ................................................................. 50 4 RESULTADOS ...................................................................................... 52 4.1 Sequenciamento .................................................................................... 52 4.1.1 Genes BRCA1, BRCA2, TP53 e CHEK2 ............................................... 52 4.1.2 Genes MLH1 e MSH2 ........................................................................... 53 4.2 Hibridação genômica comparativa baseada em arrays (aCGH ou CGH array) ............................................................................................ 57 4.2.1 Casos sem mutação nos genes BRCA1, BRCA2, TP53, CHECK2, MLH1 e MSH2 ....................................................................................... 57 4.2.2 Casos com mutação .............................................................................. 117
4.2.3 Análise de CNVs entre os familiares ..................................................... 123 4.3 Análise em famílias específicas ............................................................. 139 4.3.1 Família SM56 (Grupo 1) e SM37 (Grupo 2) ........................................... 139 4.3.2 Família SM89 ........................................................................................ 166 5 DISCUSSÃO ......................................................................................... 182 5.1 CGH array ............................................................................................. 185 5.1.1 Casos sem mutação nos genes BRCA1, BRCA2, TP53, CHECK2, MLH1 e MSH2 ....................................................................................... 185 5.1.2 Casos com mutação .............................................................................. 201 5.1.3 Análise de CNVs entre os familiares ..................................................... 204 5.2 Análise em famílias específicas ............................................................. 210 5.2.1 Família SM56 (Grupo 1) e SM37 (Grupo 2) ........................................... 210 5.2.2 Família SM89 ........................................................................................ 219 6 CONCLUSÕES ..................................................................................... 223 7 REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS ..................................................... 225 ANEXOS Anexo 1 Heredogramas Anexo 2 Critério de Amsterdam Anexo 3 Critério de Bethesda
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Anexo 3 - Critérios de Bethesda pa
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