francine blumental de abreu - PHL © Elysio - FUNDAÇÃO ANTÔNIO ...

. qPCR
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Com o objetivo de confirmar as perdas genômicas envolvendo o gene
ROBO1 detectado nos probandos SM56 e SM37 e seus familiares, SM56.2
e SM37.2 foi utilizada a técnica de qPCR. Foram construídos dois pares de
iniciadores: (P1) flanqueando a sonda S20 mapeada no íntron 4-5 e
envolvida na deleção identificada no CGH array e (P2) englobando a sonda
S26 mapeada no éxon 4, o mais próximo a deleção. A reação foi realizada
nos casos SM56 e SM37 e em quatro familiares da paciente SM37 (SM37.2,
SM37.3, SM37.4, SM37.5).
As eficiências da PCR para os genes endógenos HPRT e GAPDH foi
de 2,03 e 2,18 respectivamente. Para o gene alvo ROBO1, as eficiências
foram 2,04 (iniciador 1) e 2,02 (iniciador 2), respectivamente.
A quantidade do número de cópias do gene ROBO1 foi calculada a
partir da relação entre o gene HPRT e GAPDH, uma vez que o HPRT está
localizado no cromossomo X (Xq26.1) e o GAPDH, no cromossomo 12
(12p13). Com isso, mulheres apresentam duas cópias de cada gene e
homens, uma cópia do HPRT e duas cópias do GAPDH. Dessa maneira, os
intervalos para a dosagem gênica foi: perda, abaixo de 0,661; normal, entre
0,689 e 1,451 e ganhos, acima de 1,512 (Tabela 29).