francine blumental de abreu - PHL © Elysio - FUNDAÇÃO ANTÔNIO ...

foram submetidas a tratamento com colchicina 0,0016% por 1 hora. Em
seguida, a preparação foi submetida a tratamento com solução hipotônica
KCl 0,075M seguido de fixação com metanol:ácido acético (3:1) por três
vezes.
As lâminas contendo as preparações cromossômicas foram
submetidas ao bandamento DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)-reverso
(padrão de bandas semelhante ao bandamento GTG). A técnica usada
consiste na imersão das lâminas contendo as preparações celulares em
solução seriada de etanol (70%, 90%, 100%) por 3 min cada. Após a
secagem, as lâminas foram tratadas em solução de pepsina 10% a 37°C por
10 min. Em seguida, foram incubadas em solução 2xSSC a 37°C por 10 min
e lavadas novamente em solução seriada de etanol. Após a secagem, as
lâminas foram colocadas rapidamente em solução de formamida a 71°C e
lavadas em solução seriada de etanol. Após a secagem, foi adicionado 8 µL
de DAPI nas regiões com maior número de metáfases. Em seguida, as
lâminas foram mantidas a -20C por 24h antes da análise cromossômica.
A análise citogenética foi realizada a partir da montagem e elaboração
das fórmulas cariotípicas segundo recomendações do ISCN (2009). Um total
de 40 metáfases por caso (SM89, SM89.2, SM89.3, SM89.4, SM89.5,
SM89.6, SM89.7) foram analisadas no microscópio Olympus BX61
conectado a um sistema de análise de imagens, Software BandView 4.5
(Applied Spectral Imaging, Israel).
51